[发明专利]重组人血管内皮抑制素在制药中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，具体涉及重组人血管内皮抑制素的制药用途，该药物可用于子宫内膜异位症的治疗。

背景技术

正常的子宫内膜覆盖于子宫体腔面，如因某种因素使子宫内膜在身体其他部位生长，即可成为子宫内膜异位症。子宫内膜异位症是一种具有侵袭性的妇科常见病，可侵入包绕盆腔的腹膜、悬吊子宫的韧带、子宫的近邻-膀胱、直肠，以及大网膜、阑尾、小肠、腹壁切口，远及肝脏、胆囊、肾脏、肺脏、胸腔、四肢肌肉及骨骼等脏器，甚至有发生在前庭大腺内的异位病灶，有时输卵管壁亦可以被累及。近年来该病的发病率具有明显上升的趋势。子宫内膜异位症临床表现有通经、慢性盆腔痛、原发或继发不孕、月经失调、性交痛、肠功能改变及泌尿系统症状等。子宫内膜异位症不孕发生率高达30％～40％，给妇女的身心健康带来较大伤害。

人血管内皮抑制素(endostatin)是胶原XVIII羧基端的一段分子量大小为20kDa的酶切产物，具有抑制血管内皮细胞增殖、迁移，和体内血管生成的活性，是目前已知最强的内源性血管形成抑制因子。

重组人血管内皮抑制素是利用DNA重组工程技术，以原核或真核表达载体，将人血管内皮抑制素基因经克隆、表达和纯化得到的有血管生成抑制活性形式的蛋白质。

中国发明专利(专利公开号为CN1324818A，公开日为2001年12月5日，发明名称为“生产内皮抑制素的方法”)提供了一种改良的，以更高的产率和更简单的纯化工艺生产重组人内皮抑制素的方法。该发明利用DNA重组工程技术，以大肠杆菌表达系统，以简单的方法和较低的成本大批量生产N末端带有(Met)GlyGlyXaaHisHisHisHisHis附加氨基酸序列的人血管内皮抑制素(其中Xaa代表中性氨基酸或不存在)，不仅保留了endostatin的完全的生物学活性，而且没有产生因加入附加N端序列所致的体内免疫性。上述附加氨基酸序列不仅提高了内皮抑制素结构基因的转录和翻译起始效率，有利于重组蛋白的纯化，而且附加氨基酸序列的结构也增加了重组蛋白的稳定性。

激素疗法和手术是现有技术用于治疗子宫内膜异位症的两种主要治疗方式。使用激素的副反应较多，如毛发增多、声音变粗、水肿、体重增加等，常常导致中途停药，影响疗效，从而限制了这些药物的临床应用。手术治疗疗程短，尤其对重症者、纤维化多、粘连紧密、药物不易奏效的病例比较适用。但即使有限的外科治疗也可导致生育率显著下降，而且多达40％的患者在五年内还需再次手术，单用手术不能期望能治愈该疾病。

发明内容

子宫内膜异位症是育龄期妇女的常见病和多发病，虽为良性，但其发生、发展却与肿瘤类似，存在明显的新生血管依赖性。有研究证实，子宫内膜异位在腹腔内生成，必须由新生血管提供足够的血供，患者腹腔液中血管生成因子的活性也明显增高，用腹腔镜观察发现典型的异位内膜病灶周围有新生的毛细血管围绕。这些证据提示我们，新生血管的生长不仅是子宫内膜异位症的一个重要病理表现，也可能在发病过程中起着重要作用。从这个机制上考虑，如果能用某些治疗手段特异性地抑制异位病灶新生血管的增殖，则可能为治疗子宫内膜异位症带来新的突破。

为了克服子宫内膜异位症传统疗法副反应大、复发率高的缺陷，本发明提供了重组人血管内皮抑制素的一种制药用途，具体是使用重组人血管内皮抑制素制备治疗子宫内膜异位症的药物的制药用途，该药物具有特异性强、无毒、无耐药性的优点。

本发明的技术解决方案涉及重组人血管内皮抑制素在制备治疗子宫内膜异位症的药物中的应用。

本文中所述重组人血管内皮抑制素保留了endostatin的完全的生物学活性，可运用基因工程手段获得，通过将人的血管内皮抑制素基因或将改构的人血管内皮抑制素基因构建到大肠杆菌(E.Coli)或毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中，经过发酵、分离、纯化等手段得到。

本发明中优选的重组人血管内皮抑制素是在人血管内皮抑制素编码氨基酸序列的起始氨基酸Met后依次添加0-4个任意氨基酸和2-8个组氨酸序列。其制备方法同中国发明专利(专利公开号为CN1324818A，公开日为2001年12月5日，发明名称为“生产内皮抑制素的方法”)。

上述重组人血管内皮抑制素的起始氨基酸Met可能被切除，原因是在表达宿主中蛋白翻译后加工过程中可能被删除。