[发明专利]一种纯化甘草多糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于医用药物、化工领域，特别涉及一种用大孔吸附树脂纯化甘草 多糖的方法。

背景技术

甘草多糖是甘草的主要活性成分之一，具有较强的免疫作用和抗肿瘤活 性。目前，甘草多糖的纯化主要是用层析柱法，层析材料主要用Deae-Cellulose 和Seperdex等，这种方法有操作复杂、效率底、成本高等缺点；如中国专利“甘 草多糖”(CN1387855)中纯化甘草多糖的层析材料是Dese-Cellulose(DE -32)和SeperdexG-75。

发明内容

本发明公开了一种纯化甘草多糖的方法，目地是提供一种操作简便、成本 低的纯化甘草多糖的工艺方法。本发明包括下述步骤：

(1)将甘草根或茎用水冲洗除杂，晾干后粉碎过筛。

(2)先用乙醇浸泡后，再用水浸提取、热水浸提取、稀碱液提取、超声提取或 微波提取中的任意一种提取方法，提取2～3次：

(3)合并提取液，将提取液减压蒸溜浓缩；

(4)用乙醇沉淀浓缩液，得粗甘草多糖；

(5)粗甘草多糖液用Sevage法除蛋白质；

(6)甘草多糖液用MD(3000-4000)透析袋透析；

(7)将处理好的甘草多糖液过LSA-5B型大孔树脂柱。

(8)静置；

(9)用乙醇作洗脱剂洗柱。

(10)用乙醇沉淀洗脱液，干燥后得甘草多糖。

木发明和目前常用的分离纯化甘草多糖的方法有所不同，主要是本发明用 的柱层析材料是新型大孔树脂材料LSA-5B，以及最佳上柱及洗脱条件。其主要 优点是；

1、树脂材料价格低，总体成本低。

2、处理量大，效率高。

3、操作简便，重复性好。

4、树脂对甘草和特异性吸附效果好。

5、适于工业化生产。

综上所述，该方法可以替代目前的纯化甘草多糖的方法。

附图是甘草多糖制备工艺流程的多糖制备工艺图。

具体实施方案

实施例1

取3-4年生甘草根或茎，水洗去杂，晾干后粉碎过30目筛；

用75％左右的乙醇浸泡二次，每次浸泡时间为8-10小时，浸泡后的甘草粉 末用水冲洗，目的是除去醇溶性杂质，然后晾干；

用超声波辅助提取法提取甘草多糖；参数如下；超声功率1000w，提取时 间为30分钟，提取水温45℃，提取料液比1∶10，提取次数3次。

将提取液合并，然后减压蒸馏浓缩；减压蒸馏时温度设定在60℃。

将甘草多糖液和95％的乙醇按1∶4(体积比)，搅拌均匀后放入温度≤0℃冰箱 内沉淀8-10小时，将上层清液弃去。沉淀在离心机中离心分离(转速为每分钟 2000转，离心时间为4分钟)。沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚交替洗涤2-3次，温 水溶解后重复醇沉一次，沉淀用真空干燥箱在60℃温度下干燥，得灰白声块状甘 草多糖；

将灰白色块状甘草多糖研磨溶解后用Sevage法除蛋白质4次；方法如下； 按体积比甘草多糖液∶氯仿∶正丁醇＝25∶5∶1比例将氯仿和正丁醇的混合液倒入甘 草多糖液中，二者混合后剧烈振荡25-30分钟，然后倒入分液漏斗中静置4-5小 时；上层为氯仿和正丁醇中层为蛋白质下层为甘草多糖液。

甘草多糖液用MD34(4000-6000)透析袋透析12小时；

用95％乙醇醇沉淀一次；

将预处理好(预处理的方法按说明书里的方法)的LSA-5B型大孔树脂湿法 装柱。将上样液配制成pH为7.5-8.5、甘草多糖浓度为2mg/mL后以2BV/hr流速 上柱。上样量为5BV。用2.5BV的蒸馏水以4BV/hr流速冲洗层析柱，静置8小时 后用55％乙醇为洗脱剂，以3BV/hr的流速洗脱，洗脱剂用量为3BV。洗脱下来的甘 草多糖液减压浓缩(温度为60℃)干燥后得甘草多糖。所得甘草多糖纯度达50％ 左右。

附图说明：

附图是甘草多糖制备工艺流程图。