[发明专利]α-雄烷醇的制备及含量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种甾体化合物的制备方法，尤其涉及α-雄烷醇的制备方法，本方面还涉及一种检测α-雄烷醇含量的质量控制方法，属于微生物发酵领域。

背景技术

α-雄烷醇是一种甾体化合物(又名5α-androst-16-en-3α-ol，3α-hydroxy-5α-androst-16-ene，16-[5α]androsten-3α-ol，androstenol)，未阉的公猪唾液、睾丸、肝中均含有该化合物，在人的血浆、腋汗及尿液中也有发现。α-雄烷醇的结构式如下所示：

α-雄烷醇具有调节女性月经周期的功能，虽然该化合物是否具有引起女性性激动的性激素类作用目前还不能确定，但已有企业将α-雄烷醇开发成为一种商品——费洛蒙(pheromone)，价值不菲。最近研究表明，α-雄烷醇还具有调节脑应激性的作用，具有抗失眠、抗抑郁、抗焦虑、抗癫痫等功能(Rafal M.Kaminski，Herbert Marini，Pavel I.Ortinski，Stefano Vicini，Michael A.Rogawski.The Pheromone Androstenol(5α-Androst-16-en-3α-ol)Is a Neurosteroid Positive Modulator of GABAA Receptors.Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 2006，317：694-703)。

然而，目前并没有适合α-雄烷醇大规模工业化生产的方法，主要以化学合成方法少量制备该物质。化学合成法存在较大弊端，一是规模小、产量低，二是化学残留难以除去，三是生产成本高，这些因素导致了α-雄烷醇的价格高昂。因此寻找一种适合大规模工业化生产α-雄烷醇的技术和方法，成为α-雄烷醇研发的重中之重。迄今为止，除了化学合成法，国内外未见有其他生产α-雄烷醇方法的报道。

块菌(truffle)在生物分类学上属于子囊菌亚门(Ascomycotina)、块菌目(Tuberales)、块菌科(Tuberaceae)、块菌属(Tuber)。常见的块菌有黑孢块菌(Tuber melanosporum)、夏块菌(Tuber aestivum)、白块菌(Tuber magnatum)、印度块菌(Tuberindicum)和中国块菌(Tuber sinense)。1981年，曾有人从黑孢块菌的子实体中分离得到α-雄烷醇(R.Claus，H.O.Hoppen，H.Karg，The secret of truffles：A steroidalpheromone？Experimentia 1981，37：1178)，但之后一直未见α-雄烷醇与块菌的相关报道。目前，市场上的块菌主要来源于野生及半人工模拟栽培。野生的块菌资源相当有限，而且地域局限性和生长环境要求苛刻。半人工模拟栽培块菌，从接种到形成子实体需要7-9年，而且人工栽培过程的质量无法控制。物以稀为贵，素有“黑色钻石”之称的黑孢块菌在国际市场上价格高达1000多美元每公斤。综上所述，开发研究出一种廉价易行的生产α-雄烷醇的方法具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明首先所要解决的技术问题是克服现有技术所存在的不足，提供一种新的α-雄烷醇的制备方法，该方法切实可行、操作简单、周期短、质量可控、无毒性、成本低、易规模化工业生产，能够很好地解决目前化学合成α-雄烷醇产生的有机残留、规模小、产量低、成本高等一系列问题。

本发明首先所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种制备α-雄烷醇的方法，包括：将块菌属(Tuber)菌株进行液体发酵，得到含有α-雄烷醇的发酵液或菌丝体。

所述的块菌属(Tuber)优选为中国块菌(Tuber sinense)、印度块菌(Tuber indium)、黑孢块菌(Tuber melanosporum)、白块菌(Tuber magnatum)或夏块菌(Tuber aestivum)；这些块菌属菌株都可从商业途径购买得到。

所述的液体发酵依次包括以下步骤：斜面菌种培养、一级液体种子培养、二级液体种子培养、液体发酵；其中所述的液体发酵包括摇瓶或生物反应器规模的发酵过程。

上述各个步骤中所用到的培养基和培养条件可以是块菌属(Tuber)菌株在进行液体发酵时所常用的培养基和培养条件。

优选的，所述的培养基和培养条件分别如下：

(1)斜面菌种培养：