[发明专利]表达人CREG的重组腺病毒及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种携带人E1A激活基因阻遏子(CREG)基因的重组腺 病毒，本发明还涉及所述重组腺病毒用于制备对PCI术后再狭窄具有 明确抑制作用的药物的用途。

背景技术

经皮冠状动脉内介入治疗(PCI)是目前冠心病治疗的主要手段之 一，全球每年有超过280万的冠心病患者接受PCI治疗，但术后 10％^-70％的再狭窄发生率降低了其带来的益处。在我国，PCI的数量逐 年递增，再狭窄发生的数量也逐年上升，已经成为一个非常严峻的问 题，针对再狭窄的发生，临床上应用了许多方法来预防其发生发展， 包括抗血栓、调脂、再次PCI、支架植入术、切割球囊、药物洗脱支 架、血管内放射治疗及光动力疗法等。但这些方法不能根除再狭窄， 不仅费用昂贵，而且长期效果尚不确定。

基因治疗再狭窄越来越显示出优势。从基因水平来看，任何疾病 都是由于体内基因发生改变而引起的，将有治疗作用的基因通过一定 方式导入人体靶细胞以纠正基因的缺陷可以达到治疗疾病的目的，对 于再狭窄的治疗也是如此。

E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A- activated genes，CREG)是一种细胞转录调控因子，其最早是Gill 等通过酵母双杂交技术在果蝇cDNA文库中获得的可能与TBP转录因子 相互作用的蛋白质序列，研究发现其部分氨基酸序列与E1A相同，故 可以直接对抗E1A的激活作用。随后在人Hela细胞cDNA文库中克隆 到全长约为2.0kb的人CREG基因的cDNA全长序列(Gill G.Mol Cell Biol，1998；18(9)：5032-5041)。文献检索发现，CREG蛋白在成熟分 化的组织细胞中广泛表达，在去分化组织如小鼠胚胎干细胞、人畸胎 瘤细胞却是低表达的，研究表明CREG具有抑制细胞增殖的作用，提示 其可能对以血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC) 增生为主要病理机制的PCI术后再狭窄防治具有潜在价值[Veal E. Oncogene.2000；19(17)：2120-2128；Gill G.Mol Cell Biol，1998；18(9)：5032-5041；Di Bacco A.Oncogene，2003； 22(35)：5436-5445]。本发明人在国际上最先报道了CREG基因对体外 培养和在体损伤后的血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用(Han YL.Zhonghua yi xue za zhi，2005；85(1)：49-53)，其中介导CREG 基因的载体为逆转录病毒载体。

然而，逆转录病毒存在以下缺陷：首先，逆转录病毒仅能感染增 生期的血管平滑肌细胞，感染效率较低；其次，逆转录病毒载体是一 种能够稳定整合到宿主细胞基因组中并长期稳定表达的载体，因而可 能破坏宿主细胞基因组的稳定性，不具有临床用药的可行性；再次， 在防治PCI术后再狭窄的研究中，最理想和最可行的给药途径为血管 内给药，而逆转录病毒载体仅适用于通过动脉球囊损伤术后聚醚 (pluronic F127)载体包裹血管外膜向血管内膜渗透的缓释方式完成 (因球囊损伤术后血管的血管平滑肌细胞增殖需要一定过程，血管内 的即刻给药方式是不起效的)，但这种缓释方式仅适用于动物的实验 性研究，缺乏临床应用的可行性。

为克服上述现有技术的缺陷，本发明人采用经修饰的腺病毒作为 载体，构建了携带人CREG基因的重组腺病毒，有望用于防治PCI术后 再狭窄的基因治疗。

发明内容

本发明的一个方面，涉及一种携带人CREG基因的重组腺病毒。 在本发明中，所述CREG基因是指人CREG基因，其序列如SEQ ID NO：1 所示(网址为：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez？db ＝Nucleotide，GenBank登录号NM_00385。具体序列如下所述，方框所 示为CREG起始和终止密码子)

5                                                         ，

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