[发明专利]诊断结核病的基于结核杆菌抗原性多肽的组合物

说明书

技术领域

本发明涉及结核病的诊断领域。更具体而言涉及使用源于结核杆菌的 多种抗原性多肽的组合诊断结核病的领域。

发明背景

近年来，结核病死灰复燃，成为全球关注的公共卫生问题和社会问题。 据统计，目前全球有肺结核病人2000万，新发病人1000万，每年死亡人 数300万，超过了其它传染病的总和，成为传染病的头号杀手。

肺结核显示出全球性流行病的所有主要特征，并在全世界范围内蔓延。 地球上大约有1/3的人感染结核杆菌，导致每年800万例活动性肺结核和 300万人死亡。结核杆菌多重药耐药株的出现以及合并HIV感染使得形势 变得更为严峻。如果不能有效控制，在未来10年内，大约有3000万人会 因此而丧命，还有9000万活动性结核新发病例。结核如此强大的流行性和 传染性对公众健康来说是一个巨大的挑战，人们迫切需要解决这些问题的 方法，然而现存的一些对抗结核的策略是远远不够的，尤其在诊断方法中 存在着较多问题。

目前结核病的诊断虽然有多种方法，但都存在这样或那样的问题。影 像学诊断虽然仍是主体，但是它需要其它辅助诊断方法；痰涂片简单易行， 但阳性率低；痰培养是金标准，但周期太长，不能满足临床需要；PCR法 敏感性高、诊断速度快，但存在不稳定性；噬菌体裂解法可以检测活结核 杆菌，不能检测非结核杆菌感染，更加适用于结核菌抗药性实验研究；而 血清学诊断技术有其固有的优势，如操作简便、快速、易判断结果、稳定 性好、便于推广、无需特殊精密仪器等。

对于结核病检测的血清学检测，寻找高敏感性和高特异性的抗原成分， 建立高特异性高敏感性的检测方法是解决结核病早期快速准确诊断的关 键。目前越来越多的兴趣投向建立一种特异性和灵敏性都比较可靠的血清 学结核病诊断方法。传统上使用的结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)所包含的 抗原为致病性分支杆菌、环境分支杆菌及卡介苗(BCG)所共有，不能明确 区分BCG免疫、环境分支杆菌感染和致病性结核杆菌感染。目前研究的 用于诊断结核病的最重要的抗原包括38kD抗原、ESAT-6、CFP10、MPT64 等，这些都作为血清学检测活动性结核的标志物。

38kD抗原是一种脂蛋白和主要免疫原，是目前最为常用的结核病诊断 抗原之一。38kD抗原是结核杆菌种特异性蛋白质抗原且含量高于BCG10 倍。在用于结核血清学检测时，该蛋白的敏感性和特异性优于其它单一抗 原。有研究证实用38kD抗原检测肺结核病人血清，灵敏度与特异性分别 为65.6％和95.8％(WilKinson等，J Clin Microbiol，35(3)：553-557(1997))。

早期分泌性抗原靶(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP10)是结核 病免疫诊断中两个很有前途的抗原，具有较强的细胞免疫活性，在抗结核 感染的免疫应答中起重要作用。这两个抗原均由RD1区编码，该区只存在 于致病性结核杆菌基因组中，所有BCG菌株基因组中均缺乏该区域 (Mahairas GG等，Bacteriol，178：1274-1282(1996))。ESAT-6和CFP10 可形成异二聚体结构，联合应用ESAT-6和CFP10诊断结核病发现混合抗 原敏感性较单抗原增加，而不降低其特异性(van Pinxteren LAH等，Clin Diagn Lab Immunol，7(2)：155-160(2000))。所以，ESAT-6和CFP10有望 成为诊断动物和人致病性结核杆菌感染的特异性抗原。

MPT64是结核杆菌生长最早分泌的主要蛋白，仅在结核杆菌及牛型分 支杆菌中存在，而作为疫苗的BCG中则不含。天然的MPT64和重组的 MPT64均可使结核病人或结核菌素阳性者产生T细胞反应和皮肤延迟型 (DTH)超敏反应。但由于MPT64只存在于结核杆菌复合群中，大多数BCG 菌株缺乏MPT64基因，BCG接种者或环境分支杆菌感染者(如鸟分支杆菌) 对MPT64皮肤试验不反应。有研究结果表明，虽然以MPT64蛋白作为抗 原检测抗结核抗体的阳性率在各种结核杆菌分泌性蛋白中是较低的，但如 果与其它蛋白形成融合蛋白则有可能具有较好的稳定性(van Pinxteren LAH等，Clin Diagn Lab Immunol，7(2)：155-160(2000))，因此MPT64 蛋白有希望成为结核病血清学诊断的组合抗原的候选者之一。