[发明专利]抗肿瘤疫苗、其制备方法以及抗肿瘤免疫疗法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及抗肿瘤疫苗的制备。

背景技术

对于肿瘤疾病的治疗，由于手术、化学疗法和放射线疗法在实施中受 到限制，迫切需要治疗肿瘤患者的新方法的开发。特别是，人们相信，由 于免疫治疗的原则是增强人体自身的、防御性的抗肿瘤免疫能力，因而免 疫疗法的发展前景良好。

免疫治疗的有效方法之一是疫苗接种。疫苗接种的效果好坏，取决于 由肿瘤抗原引起的免疫应答强度，这些肿瘤抗原可存在于疫苗的组分中， 也可存在于疫苗制备的不同阶段(例如，基于抗个体抗体，树突状细胞等 而制备的疫苗)。因此，肿瘤抗原的分离是开发抗肿瘤疫苗的必要先决条 件。

现已知有很多不同制备抗肿瘤疫苗的方法。

一些疫苗是利用肿瘤细胞(TC)的特异性抗原制备——即肽类、热休 克蛋白、多糖和其他物质。特别公知的方法是通过合成的方法制备肿瘤肽 类抗原。由9个氨基酸合成的肽类疫苗，在髓细胞性白血病患者的临床试 验中效果良好(Williams R.，″Harnessing the Immune System：The Promise and Potential of Cancer Vaccines″，Oncolog.，2005，v.50，№4)。其他的肽类治 疗效果不一。例如，gp100蛋白组成的肽类在初期效果良好，但不能引起 足够的免疫应答来对抗患者的肿瘤发展(Yu Z.，Restifo N.P.，″Cancer Vaccines：Progress Reveals New Complexities″，J.Clin.Invest.，2002，v.110， 289-294)。

使用肿瘤糖类物质作为激活免疫反应抗原的方法是众所周知的。但 是，类似的抗原疗效仅表现在对单一的肿瘤细胞时以及早期的转移阶段。 (Franco A.，″CTL-Based cancer Preventive/Therapeutic Vaccines for Carcinomas：Role of Tumour-Associated Carbohydrate Antigens″，Scand.J. Immunol.，2005，v.61，391-397)。

应注意的是，基于确定抗原的疫苗具有其本质缺点。肿瘤细胞不仅具 有多种抗原，而且其突变率较高且在机体中具有不断地细胞选择作用机 制，这导致新抗原和经过修饰的已有的肿瘤抗原的出现。由此使用自体疫 苗(基于病人自身肿瘤细胞的疫苗)的优点更为突出，这些自体疫苗覆盖 引起免疫反应的整个抗原谱，包括个体的和疾病状态下的特异性抗原，这 些抗原具有特定的病人在肿瘤发展过程中的所有特征。

使用外来体(exosome)制备肿瘤抗原的方法是公知的。外来体是直 径不足几纳米的囊泡，可由多种细胞分泌，包括肿瘤细胞(如，论文Wolfers J.et al.，″Tumor-derived exosomes are a source of shared tumor rejection antigens for CTL cross-priming″，Nat.Med.，2001，v.7，297-303)、T-淋巴细胞 和B-淋巴细胞(Raposo G.et al.，″B lymphocytes secrete antigenpresenting vesicles″，J.Exp.Med.，1996，v.183，1161-1172)，以及树突状细胞(Zitvogel L.et al.，″Eradication of established murine tumors using a novel cell-free vaccine：dendritic cell-derived exosomes″，Nature Med.，1998，v.4，594-600)。

这种方法的缺点是具有表面蛋白的外来体浓缩水平低，而这些表面蛋 白是实质上免疫治疗中的抗原。众所周知，外来体主要包含胞浆蛋白和内 涵体间隔担保(见论文Thery C.et al.，“Exosomes：composition，biogenesis and function”Reviews Immunology，2002，v.2，569-579)。该方法的第二个公 知缺点是，收集外来体所需时间较长，这使得生长培养基中必须有肿瘤细 胞，并且必须从生长培养基成分中纯化抗原。