[发明专利]多价肺炎球菌多糖-蛋白缀合物组合物

权利要求书

1、一种制备免疫原性缀合物的方法，所述缀合物包含共价连接到载体 蛋白的肺炎链球菌血清型1型多糖，所述方法包括：

(a)将纯化的血清型1型多糖与碱性pH缓冲液反应，生成部分脱氧 乙酰化的血清型1型多糖；

(b)将部分脱氧乙酰化的血清型1型多糖与弱酸反应，生成中和的， 部分脱氧乙酰化的血清型1型多糖；

(c)将中和的，部分脱氧乙酰化的血清型1型多糖与氧化剂反应，生 成活化的血清型1型多糖；

(d)将活化的血清型1型多糖与载体蛋白配合；

(e)将配合的，活化的血清型1型多糖和载体蛋白与还原剂反应，生 成血清型1型多糖：载体蛋白缀合物；及

(f)封闭血清型1型多糖：载体蛋白缀合物中未反应的醛，生成包含 共价连接到载体蛋白的肺炎链球菌血清型1型多糖的免疫原性缀合物。

2、如权利要求1所述的方法，在与载体蛋白配合前，进一步包括纯化 活化的血清型1型多糖。

3、如权利要求1所述的方法，在与还原剂反应前，进一步包括共同冻 干配合的、活化的血清型1型多糖与载体蛋白。

4、如权利要求1所述的方法，进一步包括纯化所述免疫原性缀合物。

5、如权利要求1所述的方法，其中所述碱性pH缓冲液是碳酸氢盐/ 碳酸盐缓冲液。

6、如权利要求1所述的方法，其中所述弱酸是乙酸。

7、如权利要求1所述的方法，其中所述弱酸是低离子浓度的无机酸。

8、如权利要求7所述的方法，其中所述低离子浓度的无机酸是盐酸。

9、如权利要求1所述的方法，其中所述氧化剂是高碘酸钠。

10、如权利要求1所述的方法，其中所述载体蛋白是CRM₁₉₇。

11、如权利要求1所述的方法，其中所述还原剂是氰基硼氢化钠。

12、如权利要求1所述的方法，其中所述封闭未反应的醛包括将血清 型1型多糖：载体蛋白缀合物与硼氢化钠反应。

13、一种制备免疫原性缀合物的方法，所述免疫原性缀合物包含共价 连接到载体蛋白的肺炎链球菌血清型1型多糖，所述方法包括：

(a)将纯化的血清型1型多糖与碳酸氢盐/碳酸盐缓冲液反应，生成 部分脱氧乙酰化的血清型1型多糖；

(b)将所述部分脱氧乙酰化的血清型1型多糖与乙酸反应，生成中和 的，部分脱氧乙酰化的血清型1型多糖；

(c)将所述中和的、部分脱氧乙酰化的血清型1型多糖与高碘酸钠反 应，生成活化的血清型1型多糖；

(d)纯化所述活化的血清型1型多糖；

(e)将所述活化的血清型1型多糖与载体蛋白配合；

(f)将所述配合的、活化的血清型1型多糖和载体蛋白共同冻干；

(g)将共同冻干的、活化的血清型1型多糖和载体蛋白与氰基硼氢化 钠反应，生成血清型1型多糖：载体蛋白缀合物；及

(h)用硼氢化钠封闭血清型1型多糖：载体蛋白缀合物中未反应的醛， 生成包含共价连接到载体蛋白的肺炎链球菌血清型1型多糖的免疫原性缀 合物。

14、如权利要求13所述的方法，其还包括纯化免疫原性缀合物。

15、如权利要求13所述的方法，其中所述载体蛋白是CRM₁₉₇。

16、一种制备活化的肺炎链球菌血清型1型多糖的方法，所述方法包 括：

(a)将纯化的血清型1型多糖与碱性pH缓冲液反应，生成部分脱氧 乙酰化的血清型1型多糖；

(b)将所述部分脱氧乙酰化的血清型1型多糖与弱酸反应，生成中和 的、部分脱氧乙酰化的血清型1型多糖；

(c)将所述中和的、部分脱氧乙酰化的血清型1型多糖与氧化剂反应， 生成活化的血清型1型多糖。