[发明专利]人源化的抗-D因子抗体

说明书

发明背景

补体系统在免疫复合物的清除以及在对感染试剂、外来抗原、病毒-感染细胞和肿瘤细胞的免疫应答中起着重要作用。然而，补体还参与病理性的炎症以及自身免疫疾病。因此，对过度或不受控制的补体级联激活加以抑制可以对患有这样的疾病和病情的患者提供临床益处。

补体系统包括两个不同激活途径：经典途径和旁路途径(V.M.Holers，InClinical Immunology：Principles and Practice，R.R.Rich编辑，Mosby Press；1996，363-391)。经典途径为钙/镁-依赖的级联，其通常由抗原-抗体复合物的形成激活。旁路途径为镁-依赖的级联，其通过某些易感表面(例如酵母和细菌的细胞壁多糖以及某些生物聚合物材料)上C3的沉积和活化而被激活。补体途径的激活产生补体蛋白质的生物活性片段，例如C3a、C4a和C5a过敏毒素以及C5b-9膜攻击复合物(MAC)，它们介导炎症活动，包括白细胞趋化反应，巨噬细胞、嗜中性粒细胞、血小板、肥大细胞和内皮细胞的活化，血管通透性，细胞溶解以及组织损伤。

D因子为旁路补体途径激活必不可缺的高特异性丝氨酸蛋白酶。其裂解结合C3b的B因子，产生C3b/Bb酶，其为旁路途径C3/C5蛋白转化酶的活性组分。D因子可能是用于抑制的合适靶，因为在人中其血浆浓度非常低(1.8μg/ml)，并且已经证明其为旁路补体途径激活的限速酶(P.H.Lesavre和 H.J.Muller-Eberhard.J.Exp.Med.，1978；148：1498-1510；J.E.Volanakis等，NewEng.J.Med.，1985；312：395-401)。

在动物模型和体外研究中已经显示，下调补体活性对治疗一些疾病指征有效，例如系统性红斑狼疮和肾小球肾炎(Y.Wang等，Proc.Natl.Acad.Sci.；1996，93：8563-8568)、风湿性关节炎(Y.Wang等，Proc.Natl.Acad.Sci.；1995，92：8955-8959)、心肺体外循环和血液透析(C.S.Rinder，J.Clin.Invest.，1995；96：1564-1572)、器官移植中的超急性排斥(T.J.Kroshus等，Transplantation，1995；60：1194-1202)、心肌梗死(J.W.Homeister等，J.Immunol.，1993；150：1055-1064；H.F.Weisman等，Science，1990；249：146-151)、再灌注损伤(E.A.Amsterdam等，Am.J.Physiol.，1995；268：H448-H457)、以及成人呼吸窘迫综合征(R.Rabinovici等，J.Immunol.，1992；149：1744-1750)。此外，其他炎性病症和自身免疫/免疫复合物疾病也与补体激活紧密相关(V.M.Holers，ibid.，B.P.Morgan.Eur.J.Clin.Invest.，1994：24：219-228)，包括烫伤、严重哮喘、过敏性休克、肠炎、荨麻疹、血管性水肿、脉管炎、多发性硬化、重症肌无力、膜增殖性肾小球肾炎和干燥综合症(Sjogren′s综合症)。

在补体-介导的病症领域需要抗体疗法，而本发明人源化的抗体提供了有效满足该需求的高亲和力抗体。

发明概述

一般地，本发明涉及包含小鼠抗体166-32的重链和轻链可变区序列的抗体，小鼠抗体166-32是能够抑制与D因子有关的生物活性的抗体。例如，在18μg/ml浓度时(相当于血液中人D因子摩尔浓度的约1.5倍；抗-D因子抗体与D因 子的摩尔比约1.5∶1)，可以观察到该抗体显著抑制旁路补体的活性(参见，例如美国专利号6,956,107)。

本发明还涉及小鼠Mab 166-32的人源化抗体。本发明包括这些抗体的可变重链和轻链的氨基酸序列以及其相应的核酸序列。本发明的另一个实施方案包括这些抗体的CDR序列。

本发明的另一个实施方案包括包含本发明抗体的组合物。在另一个实施方案中，本发明提供了含有本发明抗体序列的细胞系和载体。在一个方面，本发明包括制备和使用本发明抗体和组合物的方法。