[发明专利]用于蛋白质生产的最优化的宿主细胞

权利要求书

1.分离具有增加的细胞增殖速率的细胞的方法，其包括以下步骤：

将细胞群体与用于监测细胞增殖速率的荧光试剂接触；以及

分离显示出一定水平的荧光试剂的荧光的细胞，所述一定水平的荧 光试剂的荧光与细胞增殖的增加有关。

2.权利要求1的方法，其中使用流式细胞分选技术进行荧光的检 测。

3.分离具有增加的细胞增殖速率的细胞的方法，其中所述细胞还 表达高水平目的RNA，该方法包括以下步骤：

将细胞群体与荧光发生探针接触，该荧光发生探针在与所述目的 RNA杂交时发出荧光；

将所述群体与用于监测细胞增殖速率的荧光试剂接触，其中所述试 剂发出与所述荧光发生探针不同波长的荧光；以及

分离显示出增加的荧光发生探针的荧光和一定水平的荧光试剂的 荧光的细胞，所述一定水平的荧光试剂的荧光与细胞增殖的增加有关。

4.权利要求3的方法，其中检测荧光发生探针的荧光与检测荧光 试剂的荧光同时测定。

5.权利要求3的方法，其中使用流式细胞分选技术进行荧光的检 测。

6.权利要求3的方法，其中所述用于监测细胞增殖速率的荧光试 剂选自：

羧基荧光素二乙酸琥珀酸亚胺酯、SNARF-1羧酸或醋酸琥珀酸亚胺 酯。

7.权利要求3的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞、细菌细胞、 昆虫细胞、植物细胞、微生物细胞、藻类细胞或真菌细胞。

8.权利要求7的方法，其中所述哺乳动物细胞选自：中国仓鼠卵 巢(CHO)细胞、NS0细胞、HEK293细胞和Per.C6细胞。

9.权利要求7的方法，其中所述细菌细胞是BL21细胞。

10.权利要求7的方法，其中所述真菌细胞选自：金孢霉属细胞、 曲霉属细胞、木霉属细胞、网柄菌属细胞、念珠菌属细胞、酵母属细胞、 裂殖酵母属细胞和青霉属细胞。

11.权利要求7的方法，其中所述昆虫细胞是SF9细胞或SF21细 胞。

12.权利要求3的方法，进一步包括以下步骤：将显示出增加的荧 光发生探针的荧光和改变的荧光试剂的荧光的细胞与用于监测凋亡或 预凋亡标记物的试剂接触。

13.权利要求12的方法，其中所述试剂是膜联蛋白-V或碘化丙啶。

14.权利要求3的方法，其中所述目的RNA选自：编码蛋白的信使 RNA、反义RNA分子、结构RNA、核糖体RNA、hnRNA和snRNA。

15.权利要求14的方法，其中所述信使RNA编码免疫球蛋白重链， 免疫球蛋白轻链，单链Fv，Fab、Fab’或(Fab’)2抗体片断，或免 疫球蛋白的抗原结合片断。

16.权利要求3的方法，其中所述目的RNA是内源性RNA。

17.权利要求3的方法，其中所述目的RNA是外源性RNA。

18.权利要求3的方法，进一步包括培养所述分离的细胞以产生细 胞培养物的步骤。

19.权利要求18的方法，进一步包括测量所述细胞培养物的密度 的步骤。

20.产生具有增加的细胞密度的细胞培养物的方法，其中所述细胞 培养物中的细胞表达高水平的目的RNA，该方法包括以下步骤：

将细胞群体与荧光发生探针接触，该荧光发生探针在与所述目的 RNA杂交时发出荧光；

从显示出增加的荧光发生探针的荧光的群体中分离细胞；

培养所述分离的细胞以产生第一细胞培养物；

重复上述步骤以分离第二细胞培养物；

比较第一和第二细胞培养物的最大达到密度；以及

鉴定具有增加的细胞密度的细胞培养物，其中所述细胞培养物中的 细胞表达高水平的目的RNA。