[发明专利]免疫球蛋白Fc与人载脂蛋白（a）Kringle片断的融合蛋白

说明书

技术领域

本发明涉及LK8-Fc融合蛋白，其能增加抑制血管生成(angiogenesis)活性和体内稳定性，更具体地说，本发明涉及其中具有抑制血管生成活性的LK8蛋白与人免疫球蛋白IgG1的Fc区域融合的LK8-Fc融合蛋白，以及用于治疗癌症的组合物，所述组合物含有该融合蛋白。

背景技术

血管生成指的是通过其由已有血管形成新血管的过程。已经知道在正常生理条件下，血管上皮细胞保持在难以增殖的状态，并且血管生成仅仅在极其有限的情况下发生，这包括女性月经周期。在控制血管生成机制方面的失调可引起许多病理性疾病，包括癌症，糖尿病、视网膜病、风湿性关节炎、银屑病等。在肿瘤的情况下，众所周知的是虽然在没有血管的帮助下肿瘤可生长到数mm³的体积，但血管生成对于肿瘤来说是必须的(N.Eng.J.Med.，333：1757，1995；Folkman，J.，New Engl.J.Med.，285：1182，1971)。

为了开始肿瘤血管生成，应当满足两个条件，即刺激血管生成因子的增加和抑制血管生成因子的减少。内源性抑制血管生成因子的典型例子是血管生长抑制因子(angiostatin)。已经报道血管生长抑制因子是与血液凝集相关的酶血纤维蛋白溶酶原的一部分，其由kringle结构组成，并具有在体外和体内条件下抑制血管生成的能力(O′Reilly，M.S.等人，Cell，79：315，1994)。kringle结构是由大约80个氨基酸和三个分子间二硫键组成的蛋白质结构域并组成独立的折叠单元。kringle结构在许多蛋白质中被发现，诸如凝血素、尿激酶、肝细胞生长因子和载脂蛋白(a)。特别是，已经报道各种kringle，诸如凝血素kringle和尿激酶kringle结构显示了抑制血管生成的能力(Lee，T.H.等人，J.Biol.Chem.，273：28805，1998；Kim等人，J.Biol.Chem.，278：11449，2003)。

糖蛋白载脂蛋白(a)与作为低密度脂蛋白(LDL)的主要蛋白成分的apo B-100共价结合形成脂蛋白(a)(Fless，G.M.，J.Biol.Chem.，261：8712，1986)。已知脂蛋白(a)参与胆固醇在体内输送，并且血浆中脂蛋白(a)的浓度增加与动脉粥样硬化以及心脏疾病有关(A rmstrong，V.W.等人，Artherosclerosis，62：249，1986；Assmann，G.，Am.J.Cardiol.，77：1179，1996)。载脂蛋白(a)包括显示与血纤维蛋白溶酶原IV和V以及失活蛋白酶状结构域同源的两种类型的kringle结构域。根据氨基酸序列同源性，载脂蛋白(a)kringleIV-结构域被分成10个亚型(IV1-IV10)，并且除在各种人类载脂蛋白(a)基因的等位基因中具有3-42个拷贝数以外的IV2kringle以外，它们中的每个都仅仅具有一个拷贝。最后kringleV具有与血纤维蛋白溶酶原kringleV 83.5％的同源的氨基酸序列。

本发明的发明人观察到构成载脂蛋白(a)的一部分kringle(kringleKV38，此后称为“LK8蛋白”)具有在体外和体内条件下抑制血管生成的能力，这起到抗肿瘤和抑制肿瘤细胞转移作用(WO 2001/019868，题为“Angiogenesis inhibitor comprising LK6，LK7，LK8and LK68”；WO2004/073730，题为“Anticancer agent containing LK8”)。但是，发现LK8蛋白在猴子体内仅仅具有7-11小时的半衰期，因此其具有的问题在于需要以较短的间隔重复给药以便显示抗肿瘤效力。而且，血管生成抑制因子常常抑制细胞生长而不是对细胞有毒性，并且必须连续给药很长一段时间才会显示其抗肿瘤效果(Jain，R.K.等人，Nat.Clin.Pract.Oncol.，3：24，2006)。

因此，对于长期连续给药来说，需要大量的LK8重组蛋白的生产和所导致的生产成本的增加，并且高治疗成本和长期治疗时间给患者造成很大的负担。出于这种原因，在技术上难以使用LK8蛋白开发抗肿瘤剂。