[发明专利]用于产生酵母提取物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及使用外源蛋白酶产生酵母提取物的方法。

发明背景

酵母提取物用途广泛，例如，用于食品工业中的调味，用于微生物发酵 培养基中，和用作保健食品。酵母提取物的产生在文献中有描述，参见例如 Kelly，M.(1982)Yeast Extract(于：Industrial Enzymology，Godfrey，T.编)或Chae， H.J.等(2001)，Bioresource Technology 76，253-258。酵母提取物通常通过如下 方法制备，通过对细胞进行酸水解或机械或化学破坏来分解酵母，继而用内 源酶自溶，从而将酵母的大分子结构(特别是蛋白质)降解成极大量(maximum amount)的可溶性物质。可以添加内源酶，包括蛋白酶如木瓜蛋白酶，以增进 酵母自身酶的效果。在酶水解之后，将酵母提取物与细胞碎片分离，并且可 以进行巴氏灭菌和浓缩。浊度是酵母提取物的一个质量量度。低浊度使浓缩 和分离更容易。因此，对产生低浊度酵母提取物的方法存在期望。

根据本发明可应用的蛋白酶在先前已有描述。例如，源自拟诺卡氏菌属 菌种(Nocardiopsis sp.)NRRL 18262的蛋白酶在WO88/03947(其中将该菌株 称作拟诺卡氏菌属菌种菌株10R)和WO01/58276中公开。其它可用于本发明 的相关蛋白酶在WO88/03947、WO04/111220、WO04/111222、WO04/111223、 WO05/123911和WO04/072279中公开。

发明内容

本发明人已经鉴定了可用于以高产率制备浊度非常低的酵母提取物的 蛋白酶。当与等量酶蛋白进行比较时，这些蛋白酶比本领域使用的其它蛋白 酶更有效，这使酵母提取物的制造者获得更经济的产品。此外，当使用本发 明的蛋白酶制备酵母提取物时，总干固体的蛋白质含量高，这反映了高纯度。 因此，本发明涉及用于产生酵母提取物的方法，其包括：a)向包含蛋白质的 酵母添加蛋白酶，所述蛋白酶与SEQ ID NO：1具有至少50％同一性；和b) 温育从而使蛋白质水解。

发明详述

蛋白酶

术语蛋白酶(protease)用于本文是水解肽键的酶(具有蛋白酶活性)。蛋白 酶也称为，例如，肽酶、蛋白水解酶(proteinase)、肽水解酶或蛋白水解酶 (proteolytic enzyme)。

用于本发明的蛋白酶是在多肽链内部作用的内切型(endo-type)蛋白酶 (内肽酶)。

对用于本发明的蛋白酶的来源不进行限制。因此，术语蛋白酶不仅包括 天然或野生型蛋白酶，还包括任何显示蛋白酶活性的蛋白酶的突变体 (mutant)、变体(variant)、片段等，以及合成的蛋白酶，诸如改组的蛋白酶 (shuffled protease)，和共有蛋白酶(consensus protease)。这些遗传工程修饰的 蛋白酶可以如本领域通常所知的来制备，例如通过定点诱变(site-directed mutagenesis)，通过PCR(使用含有期望的突变的PCR片段作为PCR反应中 的引物之一)，或通过随机诱变来制备。共有蛋白的制备在例如EP 897985 中描述。蛋白酶变体的实例(如本文中使用的)是已缺失、插入或用其它氨基 酸取代了一个或多个氨基酸的蛋白酶。

用于本发明的蛋白酶的实例是

(i)WO01/58276中公开的源自拟诺卡氏菌属菌种NRRL 18262的蛋白 酶，所述蛋白酶的序列示于本文件的SEQ ID NO：1；

(ii)与(i)的蛋白酶具有至少50、55、60、65、70、75、80、85、90或至 少95％氨基酸同一性的蛋白酶；

(iii)(i)或(ii)的蛋白酶显示蛋白酶活性的突变体、变体或片段。