[发明专利]植物微RNA及其使用方法

权利要求书

1.一种重组DNA构建体，所述构建体包含：

(a)合成miRMON18-无应答的转基因序列，其中所述合成miRMON18-无应答的转基因序列是：

(i)由天然miRMON18-应答序列获得，即通过缺失或修饰所述天然miRMON18-应答序列内的所有天然miRMON18 miRNA识别位点，和

(ii)不被具有序列SEQ ID NO.393、SEQ ID NO.3227或SEQ IDNO.8742的成熟miRMON18 miRNA识别；或

(b)合成miRNA-无应答的转基因序列，其中所述合成miRNA-无应答的转基因序列是：

(i)由天然miRNA-应答序列获得，即通过缺失或修饰所述天然miRNA-应答序列内被至少一个选自以下的特定成熟miRNA识别的所有天然miRNA识别位点：SEQ ID NO.1-1035、SEQ ID NO.2730-3921、SEQ ID NO.5498-6683、SEQ ID NO.8409-8560、SEQ ID NO8742、SEQ ID NO.8744、SEQ ID NO.8812-8815、SEQ ID NO.8845和SEQ ID NO.8850，和

(ii)不被所述至少一个特定成熟miRNA识别；或

(c)合成miR399-无应答的转基因序列，其中所述合成miR399-无应答的转基因序列是：

(i)由天然miR399-应答序列获得，即通过缺失或修饰所述天然miR399-应答序列内的所有天然miR399识别位点，和

(ii)不被成熟miR399 miRNA识别；或

(d)合成miR319-无应答的转基因序列，其中所述合成miR399-无应答的转基因序列是：

(i)由天然miR319-应答序列获得，即通过缺失或修饰所述天然miR319-应答序列内的所有天然miR319 miRNA识别位点，和

(ii)不被成熟miR319 miRNA识别。

2.一种重组DNA构建体，所述构建体包含用于调节至少一个靶基因表达的至少一个可转录DNA元件，其中所述至少一个可转录DNA元件选自：

(a)(i)转录为具有选自以下植物miRNA前体序列折回结构的miRNA前体的DNA元件：SEQ ID NO.1036-2690、SEQ ID NO.3922-5497、SEQ ID NO.6684-8408、SEQ ID NO.8561-8417、SEQ IDNO.8743、SEQ ID NO.8800和SEQ ID NO.8816-8819，其中所述miRNA前体包含所述植物miRNA前体序列的至少90％核苷酸的连续区段，而且所述重组DNA构建体任选还包含并非所述miRNA前体序列天然启动子的启动子；或(ii)转录为具有选自以下植物miRNA前体序列折回结构的miRNA前体的DNA元件：SEQ ID NO.1036-2690、SEQ ID NO.3922-5497、SEQ ID NO.6684-8408、SEQ ID NO.8561-8417、SEQ ID NO.8743、SEQ ID NO.8800和SEQ ID NO.8816-8819，其中所述miRNA前体包含所述植物前体miRNA序列的至少90％核苷酸的连续区段，而且所述至少一个靶基因是植物内源基因，而且所述重组DNA构建体任选还包含并非所述miRNA前体序列天然启动子的启动子，而且其中所述重组DNA构建体在所述植物中的表达导致对所述至少一个靶基因的抑制；

(b)(i)转录为具有miRMON18前体序列折回结构的miRNA前体并加工为成熟miRMON18 miRNA的DNA元件，而且所述重组DNA构建体任选还包含并非所述miRMON18前体序列天然启动子的启动子；或(ii)转录为具有miRMON18前体序列折回结构的miRNA前体并加工为成熟miRMON18 miRNA的DNA元件，而且所述至少一个靶基因是植物内源基因，而且所述重组DNA构建体任选还包含并非所述miRMON18前体序列天然启动子的启动子，而且其中所述重组DNA构建体在所述植物中的表达导致对所述至少一个靶基因的抑制；

(c)(i)转录为从选自以下植物miRNA前体序列的植物miRNA前体序列折回结构获得的工程miRNA前体的DNA元件：SEQ ID NO.1036-2690、SEQ ID NO.3922-5497、SEQ ID NO.6684-8408、SEQID NO.8561-8417、SEQ ID NO.8743、SEQ ID NO.8800和SEQ IDNO.8816-8819，其中所述工程miRNA前体包含修饰的成熟miRNA；或(ii)转录为从选自以下植物miRNA前体序列折回结构获得的工程miRNA前体的DNA元件：SEQ ID NO.1036-2690、SEQ ID NO.3922-5497、SEQ ID NO.6684-8408、SEQ ID NO.8561-8417、SEQ IDNO.8743、SEQ ID NO.8800和SEQ ID NO.8816-8819，其中所述工程miRNA前体包含修饰的成熟miRNA，其中所述至少一个靶基因是植物内源基因或者所述植物的有害动物或病原体的内源基因，而且其中所述重组DNA构建体在所述植物中的表达导致对所述至少一个靶基因的抑制；

(d)(i)转录为从miRMON18前体序列折回结构获得的工程miRNA前体的DNA元件，其中所述工程miRNA前体包含修饰的成熟miRMON18 miRNA；或(ii)转录为从miRMON18前体序列折回结构获得的工程miRNA前体的DNA元件，其中所述工程miRNA前体包含修饰的成熟miRMON18 miRNA，其中所述至少一个靶基因是植物内源基因或者所述植物的有害动物或病原体的内源基因，而且其中所述重组DNA构建体在所述植物中的表达导致对所述至少一个靶基因的抑制；

(e)(i)位于转基因转录单元内或其附近并转录为包含miRNA识别位点的RNA的DNA元件，所述miRNA识别位点被选自以下的成熟miRNA识别：SEQ ID NO.1-1035、SEQ ID NO.2730-3921、SEQID NO.5498-6683、SEQ ID NO.8409-8560、SEQ ID NO 8742、SEQID NO.8744、SEQ ID NO.8812-8815、SEQ ID NO.8845和SEQ IDNO.8850，或者被从选自以下植物miRNA前体序列获得的成熟miRNA识别：SEQ ID NO.1036-2690、SEQ ID NO.3922-5497、SEQ ID NO.6684-8408、SEQ ID NO.8561-8417、SEQ ID NO.8743、SEQ ID NO.8800和SEQ ID NO.8816-8819；或(ii)位于转基因转录单元内或其附近并转录为包含miRNA识别位点的RNA的DNA元件，所述miRNA识别位点被选自以下的成熟miRNA识别：SEQ ID NO.1-1035、SEQ ID NO.2730-3921、SEQ ID NO.5498-6683、SEQ ID NO.8409-8560、SEQ ID NO 8742、SEQ ID NO.8744、SEQ ID NO.8812-8815、SEQ ID NO.8845和SEQ ID NO.8850，或者被从选自以下植物miRNA前体序列获得的成熟miRNA识别：SEQID NO.1036-2690、SEQ ID NO.3922-5497、SEQ ID NO.6684-8408、SEQ ID NO.8561-8417、SEQ ID NO.8743、SEQ ID NO.8800和SEQ ID NO.8816-8819，并且所述至少一个靶基因包含由所述转基因转录单元编码的转基因，而且其中所述重组DNA构建体在植物中的表达导致所述转基因在并非天然表达所述成熟miRNA的所述植物的细胞中表达；

(f)(i)位于转基因转录单元内或其附近并转录为包含miRNA识别位点的RNA的DNA元件，所述miRNA识别位点被成熟miRMON18miRNA或从miRMON18前体序列获得的成熟miRNA识别；或(ii)位于转基因转录单元内或其附近并转录为包含miRNA识别位点的RNA的DNA元件，所述miRNA识别位点被成熟miRMON18 miRNA或从miRMON18前体序列获得的成熟miRNA识别，并且所述至少一个靶基因包含由所述转基因转录单元编码的转基因，而且其中所述重组DNA构建体在植物中的表达导致所述转基因在并非天然表达所述成熟miRMON18 miRNA的所述植物的细胞中表达；

(g)(i)用于抑制从选自以下植物miRNA前体序列获得的内源miRNA表达的DNA元件：SEQ ID NO.1036-2690、SEQ ID NO.3922-5497、SEQ ID NO.6684-8408、SEQ ID NO.8561-8417、SEQ IDNO.8743、SEQ ID NO.8800和SEQ ID NO.8816-8819；或(ii)用于抑制从选自以下植物miRNA前体序列获得的内源miRNA表达的DNA元件：SEQ ID NO.1036-2690、SEQ ID NO.3922-5497、SEQID NO.6684-8408、SEQ ID NO.8561-8417、SEQ ID NO.8743、SEQ ID NO.8800和SEQ ID NO.8816-8819，其中所述至少一个靶基因是植物内源基因，而且所述内源基因的表达在发生所述内源miRNA天然表达的所述植物细胞中受到抑制，而且其中所述重组DNA构建体在所述细胞中的表达导致所述内源基因在所述细胞中表达；和

(h)(i)用于抑制从miRMON18前体序列获得的内源成熟miRMON18 miRNA表达的DNA元件，所述至少一个靶基因是植物内源基因，而且所述内源基因的表达在发生所述内源成熟miRMON18miRNA天然表达的所述植物细胞中受到抑制，而且其中所述重组DNA构建体在所述细胞中的表达导致所述内源基因在所述细胞中表达；或(ii)用于抑制从miRMON18前体序列获得的内源成熟miRMON18 miRNA表达的DNA元件，其中所述至少一个靶基因是植物内源基因，而且所述内源基因的表达在发生所述内源成熟miRMON18 miRNA天然表达的所述植物细胞中受到抑制，而且其中所述重组DNA构建体在所述细胞中的表达导致所述内源基因在所述细胞中表达。