[发明专利]半月板移植用组织的制备

说明书

本发明涉及一种制备用于受损或有缺陷半月板的置换和/或修补的组织基质(尤其是软组织基质)的方法。本发明还提供了用于后继移植/植入的基本上脱细胞化的半月板组织。 

背景技术

人类的膝盖是一种重要而复杂的关节，其包括三块在空间上相互联系的骨头(股骨、胫骨和髌骨)、韧带和软骨结构，所有这些(构造)的相互作用产生了各种动作。该关节中的多种膝盖骨的表面被关节软骨所覆盖。该重要的表面使骨之间得以彼此顺畅滑动，而不会造成骨损伤。半月板是一种位于骨的关节软骨表面的C型软骨垫，其通过分散重量而起到减震器的作用，并由此改善了膝关节的整体稳定性。每个膝关节有内侧和外侧半月板，其由纤维软骨细胞、蛋白聚糖以及胞外基质组成，其中胞外基质含有胶原和弹性纤维。当半月板通过伤害、疾病或炎症而受到损伤时，在受到影响的个体的膝关节中会产生伴有肿胀、疼痛和/或膝关节功能丧失的关节炎性变化。虽然撕裂的半月板具有修复的可能性，但是却不得不去除严重受损或具有大面积撕裂的半月板。 

由于成人的关节软骨一旦受损后在很大程度上就不能自然再生，过去采用各种外科手术法来治疗受伤的成人半月板，这些手术包括去除并用假体设备来进行置换。对于年长患者，膝关节置换常常是优选的选项。然而，对于较年轻的个体(年龄低于50或55岁的个体)而言，作为替代全关节置换的选择是使用假体关节或供体(donor)组织来置换受损半月板的半月板移植法。 

与使用供体组织进行的半月板置换相关的问题是：半月板是一种到处充满纤维软骨细胞的致密纤维软骨性组织，所述的纤维软骨细胞是负责合成、维持和修复胞外基质的细胞。人类内侧半月板长约4.5cm，外侧半月板长约3.5cm，它们各自的厚度为25至35mm(猪半月板的数值与人半月板的数值相似)。由于半月板是充满细胞(尤其是在微脉管系统周围)的厚而致密的组织，极难使其脱细胞化(尤其是在其中央区域)，这由此说明了很难制备用于移植的免疫惰性或脱 细胞化组织，因此存在排斥的可能性。换言之，其生物相容性低，且移植受体发生因异源移植(heterograft)或异种移植(xenograft)引起的免疫学反应的风险较高。 

为了提供非细胞的生物相容性半月板移植物，已开发了人造半月板假体。然而，与人造半月板假体相关的问题是其不如天然的半月板组织那样坚固，且其缺乏天然半月板的弹性特性，因此，该假体对震动的吸收不如天然材料有效。 

可有效使供体半月板组织脱细胞化的方法能为需要半月板移植/植入的个体的治疗提供直接的益处。 

发明概述 

根据本发明的第一方面，提供了一种制备后继用于移植入受体的供体半月板组织的方法，所述方法包括以下步骤： 

(i)在缓冲液中对组织进行超声； 

(ii)冻融所述组织； 

(iii)在低渗溶液中孵育所述组织； 

(iv)在含有阴离子去污剂的低渗溶液中孵育所述组织； 

(v)重复步骤(iii)和(iv)； 

(vi)在含有至少一种核酸酶的溶液中孵育所述组织；以及 

(vii)用氧化剂洗涤所述组织。 

优选地，可在步骤(i)之前进行步骤(ii)，也就是说可在超声处理之前对供体半月板组织进行冷冻/融解处理，这两个步骤的顺序不对本发明的范围构成限制。 

贯穿说明书和本说明书的权利要求书，词语“包括”和“包含”以及这些词语的变化形式，例如“包括(分词)”和“包括(第三人称单数)”，是指“包括但不限于”，而不是排除其它的部分、添加剂、组分、整数或步骤。 

贯穿说明书和本说明书的权利要求书，除非另有要求，单数包括复数。具体而言，在使用不确定的项目时，除非另有要求，说明书应理解为包括复数以及单数。 

与本发明的具体方面、实施方式或实施例相关的特征、整数、特性、化合物、化学部分或基团应理解为可应用于本文的任何其它方面、实施方式或实施例，除非与之相矛盾。 

在本发明的一个实施方式中，所述方法包括制备后续用于植入受体的供体半月板组织的方法，所述方法包括以下步骤： 

(i)冻融组织； 

(ii)在低渗溶液中孵育所述组织； 

(iii)在含有阴离子去污剂的低渗溶液中孵育所述组织； 

(iv)重复步骤(ii)和(iii)； 

(v)在含有至少一种核酸酶的溶液中孵育所述组织；以及 

(v)用氧化剂洗涤所述组织。