[发明专利]蛋白水解加工的质谱法分析

权利要求书

1.一种用于研究两种或更多种不同样品之间蛋白水解加工中的差 异的体外方法，包含步骤：

a)修饰所述样品中蛋白质的N-末端的和赖氨酸的胺，

b)将所述修饰的蛋白质裂解成肽并同时用O或¹⁸O标记每个样品，

c)分离N-末端肽，

d)集中步骤(b)之后标记的样品，或集中步骤(c)的分离的N- 末端肽，

e)使所述N-末端肽经历MS，

f)选择相关的肽级分进行进一步的分析，和

g)鉴定由蛋白水解加工产生的肽。

2.权利要求1的方法，其在步骤(d)之后，进一步包括步骤：

-对所述分离的N-末端肽实施肽分离步骤。

3.根据权利要求1的方法，其中在步骤(a)中用包含胺反应基团 的不同的同量异序标记试剂对每种样品进行所述修饰。

4.根据权利要求1的方法，其中步骤(b)中的裂解用胰蛋白酶进 行。

5.根据权利要求1的方法，其中N-末端肽的分离通过将亲和标签 共价连接到内部和C-末端肽的N-末端、并通过亲和层析从所述样品除 去内部和C-末端肽来进行。

6.根据权利要求1的方法，其中步骤(g)包含在MS/MS上分析鉴 定的蛋白质样品。

7.根据权利要求1的方法，其中，当使用两个样品时，步骤(f) 中的选择步骤由鉴定同位素标记的肽的峰之间的比低于0.5或高于1.5 的那些峰组成。

8.根据权利要求1的方法，其中，当使用两个样品时，步骤(f) 中的选择步骤由鉴定同位素标记的肽的峰之间的比低于0.1或高于10的 那些峰组成。

9.权利要求1的方法用于测定蛋白水解裂解位点的用途。

10.权利要求1的方法用于测定蛋白水解加工的下游效应的用途。

11.根据权利要求1的方法，其中一种或多种所述蛋白质样品是来 自肿瘤患者的身体样品。

12.试剂的试剂盒，包含一组两种或更多种同量异序标记试剂和 H₂¹⁸O。

13.根据权利要求12的试剂盒，进一步包含用于分离具有游离N- 末端的多肽的装置。

14.一种利用同位素标记用于分析两种蛋白质样品的设备(100’)， 包含两个样品源(101)、具有修饰试剂源(104′)的蛋白质修饰单元(103′)、 标记和蛋白质裂解单元(105)和相应的标记物源(107)、N-末端肽分 离单元(106)、分离单元(108)、质谱仪单元(109)和数据分析单 元(110)。

15.一种利用双标记用于蛋白质样品多通道分析的设备(100)，包 含至少两个样品源(101)、具有至少两个标记试剂源(104)的标记单 元(103)、标记和蛋白质裂解单元(105)和相应的标记物源(107)、 N-末端肽分离单元(106)、分离单元(108)、质谱仪单元(109)和 数据分析单元(110)。

16.根据权利要求14或15的设备，进一步包含样品制备单元(102)。