[发明专利]在哺乳动物细胞中将非天然氨基酸遗传掺入蛋白质

权利要求书

1.一种翻译系统，其包括

(a)选自下组的第一非天然氨基酸：

i)对-甲氧基苯丙氨酸(pMpa)；

ii)对-乙酰基苯丙氨酸(pApa)；

iii)对-苯甲酰苯丙氨酸(pBpa)；

iv)对-碘代苯丙氨酸(pIpa)；

v)对-叠氮基苯丙氨酸(pAzpa)；

vi)对-炔丙基氧基苯丙氨酸(pPpa)；

vii)α-氨基辛酸；

viii)邻-硝基苄基半胱氨酸(o-NBC)；

ix)1，5-丹磺酰丙氨酸；和

x)邻-硝基苄基丝氨酸(o-NBS)；

(b)第一正交tRNA(O-tRNA)；

(c)衍生自真细菌氨酰-tRNA合成酶的第一正交氨酰-tRNA合成酶(O-RS)， 其中所述O-RS优先用所述非天然氨基酸氨酰化所述O-tRNA；和

(d)包含(a)、(b)和(c)的宿主细胞，所述细胞选自啮齿动物细胞或灵长动物 细胞。

2.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述第一O-RS优先用所 述第一非天然氨基酸氨酰化所述第一O-tRNA，其效率至少为包含所述 O-tRNA、所述非天然氨基酸和含有选自SEQ ID NO：57-101的氨基酸序列的氨 酰-tRNA合成酶的翻译系统效率的50％。

3.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述第一O-tRNA包含 SEQ ID NO：3所示的多核苷酸序列或由其编码。

4.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述第一O-RS衍生自大 肠杆菌氨酰-tRNA合成酶。

5.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述第一O-RS包含选自 SEQ ID NO：57-101的氨基酸序列或其保守变体。

6.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述宿主细胞还包含编码 感兴趣蛋白质的核酸，所述核酸包含至少一个选择者密码子，其中所述选择者 密码子被所述第一O-tRNA识别。

7.如权利要求6所述的翻译系统，其特征在于，所述宿主细胞还包含不同 于所述第一非天然氨基酸的第二非天然氨基酸、第二O-RS和第二O-tRNA， 其中所述第二O-RS优先用所述第二非天然氨基酸氨酰化所述第二O-tRNA， 所述第二O-tRNA识别由核酸编码的选择者密码子，其不同于所述第一O-tRNA 识别的选择者密码子。

8.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述宿主细胞包含编码所 述第一O-RS的多核苷酸。

9.如权利要求8所述的翻译系统，其特征在于，所述多核苷酸包含选自 SEQ ID NO：8-56的核苷酸序列。

10.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述宿主细胞包含编 码所述第一O-tRNA的多核苷酸。

11.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述啮齿动物宿主细 胞选自大鼠宿主细胞或小鼠宿主细胞。

12.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述灵长动物宿主细 胞选自人宿主细胞、黑猩猩宿主细胞、倭黑猩猩宿主细胞、大猩猩宿主细胞、 猩猩宿主细胞、长臂猿宿主细胞、短尾猿宿主细胞、绢毛猴宿主细胞或狨宿主 细胞。

13.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述啮齿动物宿主细 胞是CHO宿主细胞。

14.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述灵长动物宿主细 胞是293T宿主细胞。