[发明专利]2’-终止子有关的焦磷酸解作用激活的聚合

权利要求书

1.反应混合物，其包含至少一种含有2’-终止子核苷酸的寡核苷酸。

2.权利要求1的反应混合物，其中所述寡核苷酸包含在寡核苷酸的 3’-末端的2’-终止子核苷酸。

3.权利要求1的反应混合物，其中所述寡核苷酸包含至少一种选自 下述的标记：荧光染料、荧光素染料、卤荧光素染料、花菁染料、二 氯罗丹明染料和能量转移染料。

4.权利要求1的反应混合物，其中所述2’-终止子核苷酸包含2’- 单磷酸-3’-羟基核苷。

5.权利要求1的反应混合物，其中所述寡核苷酸包含式：

其中

Z是O或CH₂；

B是至少一个同素环、至少一个杂环、至少一个芳基或其组合；

BG是封闭基团；

R₁是H、OH、亲水基或疏水基；

X是核苷酸或核苷酸类似物；

n是大于0的整数；且，

代表单键或双键。

6.权利要求1的反应混合物，其中寡核苷酸中的至少一个核苷酸位 置对应着靶核酸中的多态核苷酸位置，且2’-终止子核苷酸对应着靶核 酸中的多态核苷酸位置。

7.权利要求1的反应混合物，其包含一种或多种选自下述的其它试 剂：包含核苷酸去除活性的第一种生物催化剂、包含核苷酸掺入活性 的第二种生物催化剂、至少包含与寡核苷酸至少部分互补的子序列的 靶核酸、扩增子、引物核酸、探针核酸、其它核苷酸、其它寡核苷酸、 可溶的光发射改性剂、助溶剂、嵌入剂、临床样品、样品、缓冲液、 盐、金属离子、焦磷酸、甘油、二甲基亚砜和聚rA。

8.权利要求7的反应混合物，其中所述核苷酸去除活性包含焦磷酸 解作用活性和/或核酸酶活性。

9.权利要求7的反应混合物，其中所述靶核酸、扩增子、引物核酸、 探针核酸、其它核苷酸和/或其它寡核苷酸包含至少一种选自下述的标 记：荧光染料、荧光素染料、卤荧光素染料、花菁染料、二氯罗丹明 染料和能量转移染料。

10.权利要求7的反应混合物，其中所述探针核酸包含杂交探针、 5’-核酸酶探针和/或发夹探针。

11.权利要求7的反应混合物，其中所述其它核苷酸包含可延伸的 核苷酸和/或终止子核苷酸。

12.权利要求7的反应混合物，其中所述缓冲液包含浓度为至少90 mM的N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸。

13.权利要求7的反应混合物，其中所述第一种生物催化剂包含核 苷酸掺入活性。

14.权利要求13的反应混合物，其中所述第一种和/或第二种生物 催化剂的核苷酸掺入活性包含聚合酶活性和/或连接酶活性。

15.权利要求13的反应混合物，其中所述第一种和/或第二种生物 催化剂包含核酸酶活性。

16.权利要求13的反应混合物，其中所述第一种和/或第二种生物 催化剂包含选自下述的酶：聚合酶、末端转移酶、反转录酶、多核苷 酸磷酸化酶、连接酶、脱嘌呤嘧啶内切核酸酶和端粒末端转移酶。

17.权利要求13的反应混合物，其中所述第一种和/或第二种生物 催化剂包含在选自下述的氨基酸位置包含一个或多个突变的CS5 DNA 聚合酶：G46、L329、Q601、D640、I669、S671和E678。

18.权利要求17的反应混合物，其中所述突变包含G46E突变、 L329A突变、Q601R突变、D640G突变、I669F突变、S671F突变和/ 或E678G突变。