[发明专利]融合于碱性蛋白标签的加工酶

权利要求书

1.加工酶，其包含源于来自嗜热细菌的强碱性核糖体蛋白质的N 末端附着的标签。

2.权利要求1的加工酶，其中所述标签不包含半胱氨酸残基。

3.权利要求1-2的加工酶，其中所述标签包含约50至约250、或约 75至约200、约100至约250或约100至200个氨基酸残基。

4.权利要求1-3的加工酶，其中所述标签中约15％至约50％、约20 ％至约50％、约30％至约50％、约40％至约50％或约35％至约50％的氨 基酸残基为碱性氨基酸残基Lys和Arg。

5.权利要求1-4的加工酶，其中所述标签源于核糖体蛋白L9家族。

6.权利要求5的加工酶，其中所述标签选自肽序列：

MKVILLRDVPKIGKKGEIKEVSDGYARNYLIPRGFAKEYTEGLERAIKHEKEIEKRKKEREREE SEKILKELKKRTHVVKVKAGEGGKIFGAVTAATVAEEISKTTGLKLDKRWFKLDKPIKELGEY SLEVSLPGGVKDTIKIRVEREE(SEQ ID NO：10)；

MKVILLEPLENLGDVGQVVDVKPGYARNYLLPRGLAVLATESNLKALEARIRAQAKR LAERKAEAERLKEILENLTLTIPVRAGETKIYGSVTAKDIAEALSRQHGITIDPKRLALEKPIKEL GEYVLTYKPHPEVPIQLKVSVVAQE(SEQ ID NO：41)；

MKVIFLKDVKGKGKKGEIKDVADGYANNFLFKQGLAIEATPANIKALEAQKQKEQRQAAEEL ANAKKLKEELEKLTVEIPAKAGEGGRLFGSITSKQIAEALQAQHGLKLDKRKIELADAIRSLGY TNVPVKLHPEVTATLKVHVKEQK(SEQ ID NO：42)；

MKVVLLKDVS KIGKKGEIKN VSDGYARNYLIPKGLALEATPRVLKRLEAEKR- KKEEEKIQ IKTQNEELLKMLKKFLYKIP VKAGESGKLFGALTNSDIAK AVEKIADVNI DKKFIVLEKPIKEIGMYDVLVRLPEGVSGK IKVEVIQEGKN(SEQ ID NO：43)和

MKLILTQEVAGLGGPGDVVEVRDGYGRNYLLPKRLAMPASPGAVKQVALIKRARE VREIRDLDQARALRDQLEALPVTLPARAGSGGRLFGSVTPDDIAAAVHAAGGPKLDKRRIEIS GPIKTIGSHQVTVRLHPEVSATVSVEVVPAS(SEQ ID NO：44).

7.权利要求1的加工酶，其中所述标签通过接头序列与该加工酶附 着。

8.权利要求7的加工酶，其中所述接头序列具有1至约30、1至约 25、1至约20或1至约15个氨基酸残基。

9.权利要求7的加工酶，其中所述接头选自SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：47和SEQ ID NO：48。

10.权利要求1的加工酶，其选自氧化还原酶、转移酶、水解酶、 裂解酶、异构酶和连接酶。

11.制备权利要求1-10任一项所述的带标签加工酶的方法，包括i) 在适当的表达宿主中表达包含源于来自嗜热细菌的强碱性蛋白质的N 末端标签的加工酶，ii)将表达的带标签加工酶加载到阳离子交换柱上， iii)以及用适当的洗脱液洗脱所述带标签加工酶。

12.权利要求11的方法，其中所述加工酶为选自HRV143C蛋白酶、 HAV183C、蛋白酶TEV或RHDV 3C蛋白酶的蛋白酶。