[发明专利]编码青霉素酰化酶的DNA序列，携带该序列的新型重组DNA结构及重组微生物

说明书

技术领域：

本发明涉及一种编码青霉素酰化酶的DNA序列，携带该序列的新型重组DNA结构及重组微生物。

背景技术：

青霉素酰化酶(E.C.3.5.1.11，青霉素酰胺水解酶)是由细菌、放线菌、真菌和酵母产生的。这些重要的工业酶根据其底物特异性可以分为三种：青霉素G酰化酶(PGA)，青霉素V酰化酶(PVA)和α-氨基酸水解酶(AEH，也称氨苄青霉素酰化酶)。PGA类酶具有广泛的底物特异性，能催化青霉素和头孢菌素的氨键水解。PGA的细菌产物属于下述类别中的一种：气单胞菌，无色杆菌，产碱菌，节杆菌，芽孢杆菌，棒状杆菌，大肠杆菌，欧文氏菌，黄杆菌，克吕沃尔菌，微球菌，诺卡氏菌，变形杆菌，普罗威登斯菌，假单胞菌，八叠球菌，黄单胞菌，木质部小菌属(Process Biochem.24：146-154，1989，Process Biochem.27：131-143，1992，Biotechnol.Adv.18：289-301，2000)

除了由变异获得的能表达PGA的高产菌株之外，还可以从大肠杆菌(CS244 343和CS 246 957)，产碱菌属或粪产碱菌属(Current Microbiology39：2444-2448，1999；EP 638649，Appl.Environ.Microbiol.63：3412-3418，1997)，粘节杆菌Appl.Environ.Microbiol.54：2603-2607，1988 a 55：1351-1356，1989；Gene 143：79-83，1994)，巨大芽孢杆菌(J.Bacteriol.93：302-306，1967，Appl.Microbiol.Biotechnol.25：372-378，1987；US 3 145 395；Process Biochemistry 29：263-270，1994)，嗜柠檬酸克吕沃尔氏菌(Agric.Biol.Chem.39：1225-1232，1975；Gene 49：69-80，Biotechnol.Letters 14：285-290，1992)，雷氏普罗威登斯菌(ActaBiochim.Polonica 28：275-284，1981；J.Bacteriol.168：431-433，1986；DNA sequences 3：195-200，1992)也可以产生具有重组质粒的重组微生物，其中重组质粒中含有可以编码PGA的结构基因。

大多数产PGA的原核生物为革兰氏阴性菌，而酶是在细胞的外周胞质中。在巨大芽孢杆菌的培养中，酶是从细胞中分泌到培养基中。

青霉素G酰化酶在工业上主要用于水解头孢菌素的苯乙酰衍生物，而青霉素G用于生产中间产物6-APA和7-ADCA。现在，合成反应中也会用到这些酶，在上述中间产物的酰基化中用来生产半合成抗生素(e.g.，US 5753 458 and US 5 801 011；WO 98/04732；WO 97/04086；Enzyme Microb.Technol.25：336-343，1999；Synthesis of β-lactam antibiotics：Chemistry，Biocatalysis and Process Integration，Ed.：A.Bruggink，Kluwer Academic Publishers，Dordrecht/Boston/London，2001)。

酶是稳定地固定或封闭形成一种酶催化剂从而使PGA可以在酶催化反应中反复、长期的使用。这样，酶就能并在反应条件下显现较高的pH稳定性、温度稳定性和较长的半衰期。

发明内容

本发明的目的是提供一种长度为2646bp的核苷酸序列，该核苷酸序列与图5所示的核苷酸序列至少有95％相同。

本发明的另一个目的是进一步提供本发明的核苷酸序列的片断，至少由150个核苷酸组成的该序列片断用于编码青霉素酰化酶。

本发明还有一个目的是提供一种含有本发明的核苷酸序列或核苷酸序列片断的核酸结构，它至少具有一个调控序列，用于调控基因表达和多肽的产生，所述的多肽具有青霉素酰化酶活性。

本发明的另一个目的是提供一种重组质粒，它含有本发明的核苷酸序列或核苷酸序列片断。

本发明还有一个目的是提供一种重组表达载体，它含有本发明的核酸结构、启动子、转译启动信号和转译转录终止信号。