[发明专利]用于检测物质的核酸链及其方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于检测物质等的核酸链和涉及该核酸链的技术。更详细地讲，本发明涉及在荧光物质和淬灭物质之间的核酸序列区中具有酶裂解位点的核酸链，和使用该核酸链的方法。 

背景技术

通过探测物质发出的荧光来检测该物质存在或者它们的反应等的技术是已知的，并且它们被广泛应用于多种传感器技术等。 

例如，通过将能够特异性地与物质相互作用的探针物质引入到反应区，并且确定已经预先被荧光标记的探针物质的荧光在反应区中是否能够被检测到，从而来确认该物质存在反应区中的技术是已知的。例如，对于固定在基板(substrate)(芯片)的表面的核酸链，引入荧光标记的核酸链，通过荧光检测来检测两个核酸链之间的杂交是否存在，这个技术是DNA芯片通常使用的技术。 

另外，当存在于反应区的单链核酸互相杂交时，通过特异性地结合到互补结合位点而发出荧光的所谓的“嵌入剂”也是已知的。这样的嵌入剂具有可以省略预先给核酸链标记荧光物质的程序的优势，等等。 

“FRET(荧光能量共振转移)”表示接受从激发的荧光物质(供体)释放的共振激发能量的荧光物质(受体)被激发而发出荧光的 现象或者原理。为了产生这种“FRET”，供体和受体的荧光光谱必须是彼此重叠的，并且两种物质都必须位于固定的范围左右或者为合适的位置关系。使用这种“FRET”来检测标记有荧光物质用作供体的物质和标记有荧光物质用作受体的物质之间的相互作用是否存在的技术是已知的(见，例如JP-A-2004-065262和JP-A-2005-207823)。 

接下来，“生物发光能量共振转移(BRET)”是能够直接检测蛋白质-蛋白质相互作用的生物物理方法。这种“BRET”最初是在如Aequorea victoria水母和Renilla reniformis海肾的海洋生物中观察到的过程，可以通过荧光检测来检测到，当供体蛋白和受体蛋白彼此靠近时，产生了伴随从供体蛋白的激发能量转移的受体蛋白的能量释放。因此，BRET可以是用于检测蛋白质之间的相互作用的技术。 

当试图检测出反应区或者样品溶液中存在的极微量物质时，通常使用的技术是通过增加该极微量的物质来提高检测的敏感性。例如，通过PCR(聚合酶链式反应)方法来扩增待检测的极微量核酸链的技术已经被广泛操作。 

但是，这样的极微量物质的扩增必须小心的操作，还会进行大量的工作，并且它还经常需要特别昂贵的装置。另外，即使小心翼翼地完成工作，可能在扩增的过程中间接产生除了靶(target)物质以外的物质。此时，出现了产生检测噪音的技术问题。另外，还存在一个技术问题就是，扩增如蛋白质或者脂肪的生物物质比扩增核酸链更困难。 

由此，本发明的主要目标是提供能够以高灵敏度并且不需要扩增极微量物质来检测该极微量物质的技术。 

发明内容

本发明首先提供了用于检测的至少具有荧光物质、淬灭物质和核酸链区的核酸链，该荧光物质可以用作共振激发能量(荧光共振能量)的供体，该淬灭物质位于能够使其接受共振激发能量的位置，该核酸链区位于淬灭物质和荧光物质之间，并且具有在其中形成的由核酸内切酶裂解的酶裂解位点。 

“淬灭物质”是广义上具有降低或者淬灭荧光的功能的物质，并且没有严格限制。“核酸链”表示核苷磷酸酯的聚合物(核苷链)，其中嘌呤或者嘧啶碱基通过配糖键连接到糖，并且广泛包含包括探针DNA的低聚核苷酸、多聚核苷酸、其中嘌呤核苷和嘧啶核苷被聚合(全长或其片断)的DNA、通过反转录获得的cDNA(cDNA探针)、RNA等等。 

“核酸内切酶”是能够在内部键裂解核酸的核酸酶的总称。在本发明中，这种酶单独使用或者与其他表现出合作作用的酶联合使用。“检测用核酸链”是用于检测特定的物质、反应(包括化学键接、相互作用等)、结构等等的核酸链。它与在某些情况下被称为探针核酸链的概念一致。 

因为酶裂解位点存在于构成本发明的检测用核酸链的核酸链区中，例如可以被双链特异性AP-核酸内切酶裂解的脱碱基位点(AP位点)可以作为例子。