[发明专利]制备辛伐他汀和相关化合物的方法和材料

权利要求书

1.一种制备辛伐他汀的方法，包括如下步骤：

(1)将莫那可林J、酰基硫酯、和LovD酰基转移酶混合在一起，所述酰 基硫酯在LovD酰基转移酶存在时将二甲基丁酰基基团贡献给莫那可林J的 C8羟基；所述LovD酰基转移酶如SEQ ID NO：1所示，和

(2、)使得LovD酰基转移酶使用酰基硫酯的酰基基团来区域选择性地酰 基化莫那可林J的C8羟基；

由此制备辛伐他汀。

2.权利要求1的方法，其中在不存在分离的生物体的条件下体外制备辛 伐他汀。

3.权利要求1的方法，其中莫那可林J、酰基硫酯和LovD酰基转移酶 在产生LovD酰基转移酶的分离的生物体存在时在发酵培养基中混合，且其 中该生物体是大肠杆菌(Escherichia coli)，土曲霉(Aspergillus terreus)，红色 红曲霉(Monascus ruber)，紫色红曲霉(Monascus purpureus)，丛毛红曲霉 (Monascus pilosus)，Monascus vitreus,Monascus pubigerus，Candida  cariosilognicola，米曲霉(Aspergillus oryzea)，Doratomyces stemonitis，多变 拟青霉(Paecilomyces virioti)，桔青霉(Penicillum citrinum)，产黄青霉 (Penicillin chrysogenum)，短尾帚霉(Scopulariopsis brevicaulis)或绿色木霉 (Trichoderma viride)。

4.权利要求3的方法，其中该分离的生物体是如下的至少一种：

(a)表达SEQ ID NO：1的LovD多肽的土曲霉；

(b)不表达SEQ ID NO：3的LovF多肽的土曲霉；

(c)表达SEQ ID NO：1的LovD多肽的大肠杆菌；或

(d)不表达SEQ ID NO：4的bioH多肽的大肠杆菌。

5.权利要求1的方法，其中所选的酰基硫酯具有至少一种下列特性：

(a)能够穿过在发酵培养基内生长的大肠杆菌或土曲霉细胞的细胞膜； 或

(b、)选自由α-二甲基丁酰-S-甲基-巯基丙酸酯(DMB-S-MMP)，二甲基丁 酰-s-乙基巯基丙酸酯(DMB-S-EMP)和二甲基丁酰-S-甲基巯基乙酸酯 (DMB-S-MTG)和二甲基丁酰-S-甲基巯基丁酸酯(DMB-S-MMB)组成的组 中。

6.权利要求3的方法，其中该酰基硫酯是α-二甲基丁酰-S-甲基-巯基丙 酸酯，且其中该α-二甲基丁酰-S-甲基-巯基丙酸酯以lmM-100mM的浓度范 围存在于发酵培养基中。

7.权利要求3的方法，其中莫那可林J由所述发酵培养基内的分离的生 物体产生。

8.权利要求3的方法，其中该分离的生物体在至少一种下列条件下生 长：

(a)在温度为30-40℃之间；

(b)生长时间为4到48小时之间；

(c)在pH为7-8之间；或

(d)在包含LB，F1或TB培养基的发酵培养基中。

9.权利要求1的方法，还包括将通过所述方法制备的辛伐他汀以至少一 个纯化步骤来纯化，所述纯化步骤包括：

(a)裂解存在于混合物中的分离的生物体的细胞；

(b)离心；

(c)沉淀游离酸形式的辛伐他汀；

(d、)将游离酸形式的辛伐他汀转化为辛伐他汀盐；

(e、)过滤；或

(f)高效液相层析法(HPLC)。