[发明专利]非土壤杆菌属细菌物种用于植物转化的用途

权利要求书

1.用于转化植物细胞的方法，该方法包括：

(a)让至少第一植物细胞与非土壤杆菌(Agrobacterium sp.)的根瘤 菌细菌接触，所述细菌包含：(i)包含Ti质粒vir基因区的第一核酸， 其中所述vir基因区用于以VirD2依赖方式将目标核酸导入所述植物 细胞；和(ii)包含可操作地连接目标核酸的一个或多个T-DNA边界序 列的第二核酸；和

(b)选择被目标核酸转化的至少第一植物细胞，其中所述植物细 胞为大豆、油菜、玉米或棉花植物细胞，

其中所述根瘤菌细胞选自：根瘤菌属菌(Rhizobium spp.)、中华根 瘤菌属菌(Sinorhizobium spp.)、中间根瘤菌属菌(Mesorhizobium spp.)、 叶杆菌属菌(Phyllobacterium spp.)、苍白杆菌属菌(Ochrobactrum spp.) 和慢生根瘤菌属菌(Bradyrhizobium spp.)。

2.权利要求1的方法，其中所述根瘤菌细胞在与所述植物细胞 接触之前，在乙酰丁香酮或诱导vir基因功能的其它化合物存在下生 长。

3.权利要求1的方法，其中所述根瘤菌细胞为豌豆根瘤菌 (Rhizobium leguminosarum)。

4.权利要求3的方法，其中所述根瘤菌细胞为豌豆根瘤菌三叶 草生物变异型(R.leguminosarum bv.trifolii)、豌豆根瘤菌菜豆生物变异 型(R.leguminosarum bv.phaseoli)或豌豆根瘤菌蚕豆生物变异型 (Rhizobium leguminosarum.bv.viciae)。

5.权利要求1的方法，其中所述植物细胞包含在来自植物种子、 幼苗、愈伤组织、细胞悬液、子叶、分生组织、叶、根或茎的外植体 中；并且让所述外植体与所述细菌接触。

6.权利要求5的方法，其中所述外植体包括胚分生组织；愈伤 组织；细胞悬液；子叶；或来自叶、根或茎的组织。

7.权利要求1的方法，其中所述第一核酸和第二核酸通过电穿 孔导入所述细菌中。

8.权利要求1的方法，其中选择被所述目标核酸转化的植物细 胞在缺乏选择剂时进行。

9.权利要求1的方法，其中选择被所述目标核酸转化的植物细 胞包括在选择剂存在下培养所述植物细胞，其中所述目标核酸赋予对 所述选择剂的耐性，或可操作地连接另外的赋予对所述选择剂耐性的 核酸。

10.权利要求9的方法，其中所述选择剂为草甘膦、卡那霉素、 双丙氨膦或麦草畏。

11.权利要求10的方法，其中所述目标核酸或另外的核酸编码 EPSP合酶。

12.权利要求11的方法，其中所述EPSP合酶蛋白为CP4。

13.权利要求9的方法，其中所述选择剂为草甘膦。

14.权利要求1的方法，其中所述目标核酸物理上不与选择标记 基因连接。

15.权利要求14的方法，其中所述标记基因和所述目标核酸在 由被所述目标核酸转化的植物细胞再生的植株的后代中遗传分离。

16.权利要求1的方法，其中所述细菌包含至少第三核酸，所述 第三核酸包含另外的目标核酸，其中所述植物细胞用所述第三核酸转 化。

17.权利要求1的方法，其进一步包括从所述植物细胞再生植株， 其中所述植株包含所述目标核酸。

18.权利要求17的方法，其中从所述植物细胞再生植株包括诱 导从包含所述植物细胞的外植体形成一株或多株苗，并将至少第一苗 培养为可育的全株。

19.权利要求17的方法，其中再生通过器官形成发生。