[发明专利]分离和测定胰酶制剂样品中病毒载量的方法

权利要求书

1.一种从胰酶制剂样品中分离病毒载量的方法，包括下列步骤：

a)制备适合从胰酶制剂样品中离心分离的液体胰酶制剂试验样 品，这样做的话不会改变其病毒载量，

b)在一定条件下将步骤a)的胰酶制剂试验样品的至少一个限 定部分进行至少一次低速离心分离，在该条件下沉降常数≥120S的 病毒不会形成沉淀，

c)弃去在步骤b)的低速离心分离期间出现的任何固体沉淀，保 留胰酶制剂试验样品的上清液，

d)将在步骤c)中获得的胰酶制剂试验样品的上清液的至少一 个限定部分在不连续梯度的介质中超速离心，其中超速离心的持续时 间为至少1小时而超速离心的相对离心力为至少100,000×g，和

e)从胰酶制剂试验样品的上清液中定量分离包含所述病毒载量 的靶级分。

2.如权利要求1所要求保护的方法，其中还在步骤e)后的步骤 f)中，通过测定包含病毒载量的靶级分中的病毒感染滴度来进行胰酶 制剂样品的病毒载量的定量测定。

3.如权利要求2所要求保护的方法，其中在进行病毒载量的定量 测定前将稀释或未稀释的靶级分通过微过滤器过滤。

4.如权利要求1所要求保护的方法，其中在步骤a)中通过将胰 酶制剂样品与适合用于培养待研究的病毒类型的细胞系的细胞培养基 和一种或多种抗生素组合将该胰酶制剂试验样品制备成胰酶制剂试验 样品的混悬液。

5.如权利要求4所要求保护的方法，其中将温度冷却至0-15℃ 以进行胰酶制剂试验样品的混悬液的制备。

6.如权利要求1所要求保护的方法，其中在所有情况中，以小于 10,000×g的相对离心力来进行步骤b)的低速离心分离。

7.如权利要求1所要求保护的方法，其中在所有情况中，以 1,500-5,000×g的相对离心力来进行步骤b)的低速离心分离。

8.如权利要求1所要求保护的方法，其中进行步骤b)的低速离 心分离的持续时间是至少5分钟。

9.如权利要求1所要求保护的方法，其中进行步骤d)的超速离 心，其持续时间是2-8小时，相对离心力是200,000-350,000×g。

10.如权利要求1所要求保护的方法，其中在所有情况中，将温 度冷却至0-15℃以进行步骤b)的低速离心分离和步骤d)的超速离心。

11.如权利要求1所要求保护的方法，其中在步骤d)中引入的不 连续梯度的介质是不连续的双相蔗糖梯度。

12.如权利要求11所要求保护的方法，其中不连续梯度的介质是 由50％(wt./vol.)缓冲蔗糖溶液和20％(wt./vol.)缓冲蔗糖溶液制备 的梯度。

13.如权利要求1所要求保护的方法，其中胰酶制剂样品是猪的 胰酶制剂样品。

14.如权利要求1所要求保护的方法，其中胰酶制剂试验样品的 病毒载量包含牛轮状病毒A、脑心肌炎病毒、猪环病毒、猪细小病毒、 猪轮状病毒A、猪捷申病毒和/或猪水泡病病毒。