[发明专利]酶促制备2-羟基-2-甲基羧酸的方法

权利要求书

1.由3-羟基羧酸酶促制备2-羟基-2-甲基羧酸的方法，其特征在于， 将3-羟基羧酸在含水反应溶液中制备和/或加入到该反应溶液中，温育 并作为酸或以其盐形式获得相应转化的2-羟基-2-甲基羧酸，所述反应 溶液含有具有3-羟基-羧酸-CoA-变位酶-活性的单元，所述单元不但具 有产生3-羟基羰基-CoA-酯的活性而且具有使3-羟基羰基-CoA-酯异构 化的活性，所述具有3-羟基羧酸-CoA-变位酶-活性的单元为微生物或其 粗提取物，所述微生物是保藏号为DSM18028的细菌菌株HCM-10。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述具有3-羟基羧 酸-CoA-变位酶-活性的单元包含经分离的钴胺素依赖性变位酶。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述具有3-羟基羧 酸-CoA-变位酶-活性的单元包括产生3-羟基羰基-CoA-酯的酶或酶体 系。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使用保藏号为DSM 18028的细菌菌株HCM-10微生物，其产生或者包含钴胺素依赖性变位 酶、具有3-羟基羧酸-CoA-变位酶-活性且不但具有产生3-羟基羰基 -CoA-酯的活性而且具有使3-羟基羰基-CoA-酯异构化的活性，该微生 物在含水体系中用于从3-羟基羧酸生成相应的2-羟基-2-甲基羧酸的转 化。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

a)将具有3-羟基羧酸-CoA-变位酶-活性的所述微生物在含水体系 中用再生性原材料或由再生性原材料的利用产生的废物作为碳源和能 量源进行培养，经此细胞内地合成3-羟基羧酸-CoA-硫酯并转化生成相 应的2-羟基-2-甲基羧酸，所述微生物不但具有产生3-羟基羰基-CoA- 硫酯的活性而且具有使3-羟基羰基-CoA-硫酯异构化的活性，和

b)使相应的2-羟基-2-甲基羧酸作为酸或以其盐形式分离。

6.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述反应 在添加外源3-羟基羧酸的情况下进行。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述微生物的全 细胞不变地、渗透地或载体固定地使用。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，部分或完全地从微 生物分离细胞提取物，并任选地以纯化的形式使用。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述细胞提取物包 含钴胺素依赖性变位酶和/或合成CoA-酯的酶。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，使用所述微生 物的无细胞的粗提取物。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，为了在所述微生物 的培养期间进行酶促反应，使用糖和/或醇和/或有机酸和/或烃或其衍 生物作为碳源和能量源。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，使用具有叔丁基 残基的底物作为碳源和能量源以用于培养。

13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，使用叔丁醇作为 基础培养基中的唯一的碳源和能量源以用于培养。

14.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，由糖和/或醇和/ 或有机酸和/或烃或其衍生物生成3-羟基羧酸和从3-羟基羧酸生成2- 羟基-2-甲基羧酸的酶促反应以单一的方法步骤进行。

15.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，在添加外 源3-羟基丁酸的情况下进行2-羟基异丁酸的制备。

16.制备C2-C3-不饱和的异烯烃酸的方法，其特征在于，(a)通 过权利要求1-15任一项所述的方法制备2-羟基-2-甲基羧酸；和(b) 使根据步骤(a)制备的2-羟基-2-甲基羧酸脱水。