[发明专利]三维细胞培养

权利要求书

1.用于在体外培养脂肪细胞的方法，所述方法包括

将离体的前脂肪细胞引入到三维支持物基质中；和

容许所述前脂肪细胞在所述支持物基质中体外分化为脂肪细胞。

2.权利要求1的方法，其中所述基质是胶原基质。

3.权利要求2的方法，其中所述基质是I型胶原基质。

4.权利要求1的方法，其中所述基质包括水凝胶型物质。

5.前述权利要求中任一项的方法，其中所述将前脂肪细胞引入到所述 基质中的步骤包括将前脂肪细胞接种到处于流体形式的基质前体中，和容 许所述基质前体固化形成所述基质。

6.前述权利要求中任一项的方法，还包括从脂肪组织中分离前脂肪细 胞，从而引入到所述基质中的步骤。

7.权利要求6的方法，其中所述分离步骤包括用胶原酶消化脂肪组织， 和将前脂肪细胞和脂肪组织中的其他成分分开。

8.前述权利要求中任一项的方法，其还包括将一种或多种分化因子引 入到所述基质中的步骤，从而引起所述前脂肪细胞分化为脂肪细胞。

9.权利要求8的方法，其中所述分化因子是与引入所述前脂肪细胞同 时引入的。

10.权利要求8的方法，其中将所述分化因子引入到处于流体形式的 基质前体中，并且容许所述前体固化形成所述基质。

11.权利要求8的方法，其中通过使所述基质与包含所述因子的液体 溶液相接触，将所述分化因子引入到所述基质中。

12.权利要求8-11中任一项的方法，其中所述分化因子包括葡萄糖、 环化AMP诱导物、糖皮质素或糖皮质素类似物、胰岛素或胰岛素类似物、 和PPARγ激动剂或RXR激动剂之一。

13.权利要求8-11中任一项的方法，其中所述分化因子包括异丁基甲 基黄嘌呤、地塞米松、和胰岛素之一。

14.权利要求8-13中任一项的方法，其还包括用另一种培养基更换所 述基质中的分化因子的步骤。

15.前述权利要求中任一项的方法，其中可以将另外的细胞类型引入 到所述基质中。

16.权利要求15的方法，其中所述另外的细胞类型不包括内皮细胞。

17.前述权利要求中任一项的方法，其还包括从所述基质中释放所述 分化的脂肪细胞的步骤。

18.其中存在脂肪细胞的三维支持物基质，在所述基质中，所述脂肪 细胞是通过离体的前脂肪细胞的体外分化而获得的。

19.权利要求18的方法，其中所述基质不包含内皮细胞。

20.研究脂肪细胞对刺激的响应的方法，所述方法包括按照权利要求 1-17中任一项的方法体外培养脂肪细胞；将刺激引入到在基质中的脂肪细 胞中；和确定所述脂肪细胞对所述刺激的响应。

21.权利要求20的方法，其中所述刺激是选自包括药物、药物候选物、 小分子、生物活性分子、肽、肽片段、脂肪酸、核酸、生长因子、和分化 因子的组中的一项。

22.权利要求20或21的方法，其中所述确定所述脂肪细胞响应的步 骤包括将暴露于所述刺激的脂肪细胞与以相同方式培养但没有暴露于所 述刺激的脂肪细胞进行比较。

23.研究脂肪细胞和其他细胞类型之间相互作用的方法，所述方法包 括按照权利要求1-17中任一项的方法体外培养脂肪细胞；将另一种细胞类 型引入到所述基质中；和确定所述脂肪细胞与所述其他细胞类型的相互作 用。

24.研究脂肪细胞和其他细胞类型之间相互作用的方法，所述方法包 括按照权利要求1-17中任一项的方法体外培养脂肪细胞，其中所述基质包 含另一种或另外数种细胞类型；和确定所述脂肪细胞与其他细胞类型的相 互作用。