[发明专利]用于产生L-氨基酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及使用细菌产生L-氨基酸的方法，更具体地，涉及产生L-氨基 酸如L-赖氨酸，L-苏氨酸和L-谷氨酸的方法。L-赖氨酸和L-苏氨酸可用于作 为动物饲料，保健食品，氨基酸浸剂(amino acid infusion)等的添加剂。L-谷氨 酸可用作食品调料(food seasoning)。

背景技术

L-氨基酸已经通过使用细菌的发酵方法进行了工业化生产，所述细菌属 于短杆菌属(Brevibacterium)、棒杆菌属(Corynebacterium)、埃希氏菌属 (Escherichia)等等。产生L-赖氨酸的方法在EP 0643135 B，EP 0733712 B，EP 1477565A，EP 0796912 A，EP 0837134 A，WO01/53459，EP 1170376 A，及WO 2005/010175中有描述。在这些方法中，使用的细菌菌株有天然分离株或其人 工突变株，也有经重组DNA技术修饰从而增强L-氨基酸生物合成酶活性的 细菌菌株。

乙酰-CoA合成酶催化从乙酸、辅酶A和ATP产生乙酰-CoA、焦磷酸和 AMP的反应，其由acs基因编码(J Bacteriol.1995May；177(10)：2878-86.)。然 而，尚未报道增强乙酰-CoA合成酶的活性可以对L-氨基酸的产生有效。

发明内容

本发明的目的是提供能够有效产生L-氨基酸的细菌和使用该细菌有效产 生L-氨基酸的方法。

本发明的发明人进行了广泛的研究以实现上述目标。结果是，他们发现， 通过在产生L-氨基酸的细菌中扩增编码乙酰-CoA合成酶的acs基因，改进了 L-氨基酸的产生，从而完成本发明。

即，本发明如下。

本发明的目的是提供产生L-氨基酸的方法，所述方法包括在培养基中培 养细菌，和从所述培养基或细菌细胞中收集L-氨基酸，其中所述细菌是属于 肠杆菌科(Enterobacteriaceae family)的产生L-氨基酸的细菌，其经修饰以增强 乙酰-CoA合成酶活性。

本发明的另一个目的是提供如上所述的方法，其中通过增加编码乙酰 -CoA合成酶的acs基因的拷贝数，或者通过修饰所述基因的表达调控序列， 来增强乙酰-CoA合成酶活性。

本发明的另一个目的是提供如上所述的方法，其中所述acs基因选自下 组：

(a)包含SEQ ID NO：3的核苷酸序列的DNA，和

(b)在严紧条件下与SEQ ID NO：3的核苷酸序列的互补核苷酸序列，或者 与由所述核苷酸序列制备的探针杂交的DNA，其中所述DNA编码具有乙酰 -CoA合成酶活性的蛋白。

本发明的另一个目的是提供如上所述的方法，其中L-氨基酸选自下组： L-赖氨酸，L-精氨酸，L-组氨酸，L-异亮氨酸，L-缬氨酸，L-亮氨酸，L-苏氨 酸，L-苯丙氨酸，L-酪氨酸，L-色氨酸，L-半胱氨酸，L-谷氨酸，及其组合。

本发明的另一个目的是提供如上所述的方法，其中所述细菌属于埃希氏 菌属，泛菌属(Pantoea)，或肠杆菌属(Enterobacter)。

优选实施方案描述

在下文中，将详述本发明。

<1>本发明的细菌

本发明的细菌属于肠杆菌科，具有产生L-氨基酸的能力，并经过了修饰 从而使乙酰-CoA合成酶(ACS)的活性增强。在本文中，术语“产生L-氨基酸 的能力”是指在培养基中培养本发明的细菌时，在该培养基中以可收集的水平 产生和积累L-氨基酸的能力。本发明的细菌可能能够产生多种L-氨基酸。L- 氨基酸产生能力对于细菌可能是天然的，或者是通过如下方法获得的：通过 突变或重组DNA技术对细菌进行修饰以赋予L-氨基酸产生能力。