[发明专利]新型蛋白质表达系统

权利要求书

1.包含以下(a)～(c)步骤的在靶细胞中表达外源基因的方法：

(a)将辅助负链RNA病毒载体和携带外源基因的负链RNA病毒微型基因组导入生产细胞的步骤，

(b)回收分别包装了在该生产细胞内生产的辅助负链RNA病毒载体以及负链RNA病毒微型基因组而成的病毒粒子的步骤，

(c)将(b)步骤所回收的病毒粒子导入靶细胞的步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述(a)步骤还包含将表达NP蛋白质、P蛋白质、以及L蛋白质的载体导入生产细胞的步骤。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述辅助负链RNA病毒载体是核糖核蛋白(RNP)复合体或病毒样粒子(VLP)。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述负链RNA病毒微型基因组具有一个或多个启动子。

5.根据权利要求4的方法，其中，所述启动子中的至少一个是RNA聚合酶I启动子。

6.根据权利要求1～5任一项的方法，其中所述负链RNA病毒是副粘病毒。

7.根据权利要求6的方法，其特征为由辅助负链RNA病毒载体或负链RNA病毒微型基因组表达副粘病毒的NP蛋白质、P蛋白质及L蛋白质。

8.根据权利要求6的方法，其中所述辅助负链RNA病毒载体是包含下述负链单链RNA的载体，所述负链单链RNA经过修饰使得其不表达副粘病毒的F蛋白质、M蛋白质或HN蛋白质中的任意一个或多个蛋白质，且所述负链单链RNA的5′端尾随区被替换成前导区。

9.根据权利要求8的方法，其特征为所述生产细胞表达在辅助负链RNA病毒载体中经修饰而不表达的F蛋白质、M蛋白质或HN蛋白质中的任意一个或多个蛋白质。

10.根据权利要求8或9的方法，其中所述辅助负链RNA病毒载体经过修饰使其不表达F蛋白质。

11.根据权利要求8～10任一项的方法，其特征为所述辅助负链RNA病毒载体在P基因和/或C基因中具有突变。

12.根据权利要求11的方法，其中所述辅助负链RNA病毒载体包含以下(a)或(b)的负链单链RNA：

(a)包含序列号10的碱基序列的单链负链RNA；

(b)与含序列号10的碱基序列的负链RNA的互补链在严格条件下杂交的单链负链RNA。

13.根据权利要求6的方法，其中所述副粘病毒是仙台病毒。

14.根据权利要求6的方法，其中所述辅助负链RNA病毒载体是野生型仙台病毒载体。

15.根据权利要求1～14任一项的方法，其中所述生产细胞是表达T7RNA聚合酶的细胞。

16.根据权利要求1～15任一项的方法，其特征为在体外的靶细胞中表达外源基因。

17.根据权利要求16的方法，其中所述靶细胞是293T细胞、A549细胞、BHK-21细胞、C2C12细胞、HeLa细胞、LLC-MK₂细胞、MDCK细胞、或NIH3T3细胞中的任一种细胞。

18.根据权利要求1～15任一项的方法，其特征为在体内的靶细胞中表达外源基因。

19.包含下述负链单链RNA的辅助负链RNA病毒载体，其中，所述负链单链RNA经过修饰使得其不表达副粘病毒的F蛋白质、M蛋白质或HN蛋白质中的任意一种或多种蛋白质，且所述负链单链RNA的5′端尾随区被替换成前导区。

20.携带外源基因的负链RNA病毒微型基因组。

21.在靶细胞内表达外源基因的方法，该方法包含将权利要求19的辅助负链RNA病毒载体和权利要求20的负链RNA病毒微型基因组导入靶细胞的步骤。

22.病毒粒子的制备方法，该方法包含以下(a)和(b)的步骤：

(a)将辅助负链RNA病毒载体以及携带外源基因的负链RNA病毒微型基因组导入生产细胞的步骤；

(b)回收分别包装了在该生产细胞内生产的辅助负链RNA病毒载体和负链RNA病毒微型基因组的病毒粒子的步骤。