[发明专利]分枝杆菌SecA2突变体

说明书

对相关申请的交互参考

本申请要求于2006年1月12日提交的美国临时申请No. 60/758,944的权益。

关于联邦资助研究或开发的声明

如资金No.R01 AI54540，AI26170，AI063537和AI57158的条款 所规定的，美国政府在本发明中具有已全部偿付的许可和在有限情况 下要求专利权人以合理条件许可他人的权利，上述所有资金都是由国 立卫生院授予的。

发明背景

(1)发明领域

本发明总地涉及分枝杆菌疫苗。更加具体地，本发明涉及包含 SecA2突变的分枝杆菌组合物及其在诱导对分枝杆菌和抗原的免疫性 中的用途。

(2)相关现有技术的说明

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)-结核病的病原， 导致每年比任何其它单一病原体更多的死亡(Corbett等，2003)。结 核分枝杆菌耐药菌株的出现和HIV共感染导致这种疾病的影响越来越 恶化。该病原体显示出非凡的破坏和抵抗其感染宿主的杀菌反应的能 力。结核分枝杆菌毒力与其最初通过以许多不同方式规避宿主反应而 在巨噬细胞内存活有关。结核杆菌存留在内吞泡中(Armstrong和 Hart，1975；Clemens和Horwitz，1995)，后者由于结核分枝杆菌 介导宿主蛋白质TACO滞留在这些泡的膜上而不能与溶酶体融合 (Gatfield和Pieters，2000)。类似地，结核分枝杆菌可以下调 MHC-II(Noss等，2001)和共刺激分子(Stenger等，1998；Wadee等， 1995)的表达，调节其附近的细胞因子环境(VanHeyningen等，1997) 并抑制宿主细胞的凋亡(Keane等，1997)。尽管结核分枝杆菌规避许 多宿主反应以便在可居住的环境中维持自身，仍需要阐明介导这些效 应的细菌效应物。侵入宿主细胞后，在结核杆菌的膜和细胞壁外形成 了囊样的结构(Daffe和Etienne，1999)，这一界面包含重要的参与 发病机制和对TB的免疫应答的表面蛋白质。位于分枝杆菌与其真核宿 主之间的界面上的分泌的和细胞被膜结合的蛋白质介导宿主-病原体 相互作用。所以，这些蛋白质是候选的毒力因子，值得进一步研究 (Finlay和Falkow，1997)。

有人提出结核分枝杆菌输出型和分泌型蛋白质在毒力方面发挥作 用，并且事实上导致对TB的免疫应答(Abou-Zeid等，1988；Johansen 等，1996；Nagai等，1991；Zhang等，1992)。对几种细菌病原体的 研究揭示大多数毒力因子是分泌型的(Finlay和Falkow，1997)。研 究还强调了结核分枝杆菌的分泌型和输出型蛋白质对产生保护性免疫 应答的重要性。这一特性最显著的实证来自以下实验，其中将小鼠或 豚鼠用胞外蛋白质免疫，引发出显著的保护性免疫(Andersen，1994； Hubbard等，1992；Paland Horwitz，1992；Roberts等，1995)。 近来，输出型ERP(输出型重复蛋白质)蛋白质被显示出促成结核分枝 杆菌的毒力(Berthet等，1998)。同样地，超氧化物歧化酶(SOD)-一 种培养物滤液组分，被显示出通过干扰宿主凋亡而与毒力相关联 (Edwards等，2001)。尽管已经研究了许多分泌型蛋白质，但由于分 离膜蛋白样品的技术限制，仍然缺乏对细胞表面蛋白质的研究。

宿主细胞凋亡参与分枝杆菌属的毒力和保护性免疫(例如， Alemán等，2002；Balcewicz-Sablinska等，1998；Ciaramella等， 2000；Duan等，2001，2002；Duarte等，1997；Eddine等，2005； Grode等，2005；Keane等，2000；Kornfeld等，1999；López等， 2003；Protales-Pérez等，2002；Sly等，2003；Spira等，2003)。 但是，需要更多关于影响宿主细胞凋亡的分枝杆菌宿主基因的信息。 本发明正是致力于这种需要。

发明概述

相应地，发明人发现SecA2蛋白阻止宿主细胞凋亡。发明人还发 现不表达SecA2的分枝杆菌突变体提高了分枝杆菌诱导针对毒性分 枝杆菌或由分枝杆菌表达的重组抗原的免疫应答的能力。