[发明专利]两性自组装蛋白质在配制低水溶性的有效物质中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及两性自组装蛋白质在配制低水溶性的有效物质中的用途。

背景技术

DE 10059213A1描述了通过在含蛋白质的保护胶体中分散活性物质、 絮凝以及分离覆盖保护胶体的活性物质并转变成干粉来生产水不溶的或低 水溶性的活性物质的固体制剂的方法。将酪蛋白和牛胶原蛋白、猪胶原蛋 白以及鱼胶原蛋白作为优选的保护胶体。

DE 102004057587A1描述低水溶性活性物质和来自单细胞生物的蛋白 质材料的混合物的水性分散液及从其中制成的干粉。

发明目的

到目前为止，配制水不溶的或低水溶性的活性物质和有效物质的方法 无法满足对活性物质，特别是配制用于化妆品和制药的活性物质的所有要 求，如热稳定性、氧化稳定性和耐光性、机械稳定性与毒性的可接受性。

因此，本发明旨在提供允许配制低水溶性活性物质的方法，而且比现 有技术提供的已知方法能更好地满足上述标准。

发明内容

在第一个实施方案中，本发明涉及两性自组装蛋白质在配制低水溶性 有效物质中的用途。两亲性自组装蛋白质适于作为低水溶性的疏水性活性 物质的配制佐剂。由于其两亲性的分子特征，这些蛋白质在水溶液中能稳 定疏水性活性物质。这些蛋白质的自组装特征使其呈现更高的分子量结构， 并因此持久地包裹疏水性活性物质。

本发明另外提供生产有效物质制剂的方法，其中

(i)低水溶性有效物质与两亲性自组装蛋白质在共同分散相中混合在 一起，和

(ii)然后相分离成富含蛋白质和有效物质的相，以及缺乏蛋白质和有 效物质的相。

随后可将富含蛋白质和有效物质的相硬化并作为机械稳定的含有效物 质的蛋白质微粒分离，如果合适，进行干燥。

(i)两亲性自组装蛋白质

两亲性自组装蛋白质由氨基酸特别是20种天然形成的氨基酸构成的 多肽组成。氨基酸也可被修饰，如乙酰基化、糖基化、法尼基化。

适用于配制低水溶性有效物质的两亲性自组装蛋白质是那些可形成蛋 白质微粒的蛋白质。蛋白质微粒具有球形构造，平均粒子直径从0.1至100 μm特别是从0.5至20μm，优选从1至5μm并且特别优选从2至4μm。

蛋白质微粒可优选通过下述方法制备：

蛋白质溶于第一溶剂。可用于此处的溶剂，例如盐水溶液。具体而言， 浓度高于2M，特别是高于4M，而且特别优选高于5M的高浓度盐溶液 是合适的，其离子比钠离子和氯离子具有更显著的离液序列高的特征。这 种盐溶液的实例是6M的硫氰酸胍或9M的溴化锂。此外，有机溶剂也可 用于溶解蛋白质。具体而言，氟化醇、环烃类或有机酸是合适的。其实例 是六氟异丙醇、环己烷和蚁酸。蛋白质微粒的制备可在上述溶剂中进行。 或者，该溶剂也可由另外的溶剂代替，例如，经过透析或稀释的低浓度盐 溶液(c<0.5M)。溶解的蛋白质终浓度应在0.1至100mg/ml。该方法进行 的温度通常是0-80℃，优选5-50℃并且特别优选10-40℃。

当使用水溶液时，这些也可与缓冲液混合，优选pH范围为4-10，特 别优选5-9，尤其特别优选6-8.5。

通过加入添加剂来诱导相分离。此处在溶剂和添加剂的混合物中形成 乳化的富含蛋白质相。由于表面效应，乳化的富含蛋白质的液滴呈现圆形。 通过溶剂、添加剂和蛋白质浓度的选择，调节蛋白质微粒的平均直径在0.1 μm与100μm之间。

可用的添加剂是一方面易与第一溶剂混合，并且另一方面能诱导富含 蛋白质相形成的所有物质。如果微粒形成在有机溶剂中进行，用于该用途 的适宜有机物质应该比溶剂的极性低，例如甲苯。在水溶液中，其离子比 钠离子和氯离子具有更显著的离液序列高特征的盐(如硫酸铵、磷酸钾)可 用作添加剂。基于蛋白质溶液，取决于添加剂的性质，添加剂的最终浓度 应在以重量计1％与50％之间。

富含蛋白质的液滴通过硬化固定，其圆形状保留。这里，固定是基于 强的分子间相互作用的发展。相互作用的类型可以是非共价的，如由于分 子间β-折叠叶状晶体的形成，或共价的，如由于化学交联。硬化可以作为 由于添加剂和/或由于添加另外合适物质的结果而发生。硬化发生温度在0 ℃与80℃之间，优选在5℃与60℃之间。