[发明专利]从全血中分离红细胞的方法

说明书

发明领域

本发明涉及一种从人全血中分离红细胞的方法，特别是一种涉及使用预包被植物凝集素或抗红细胞抗体的含有磁性材料的聚合物微球分离人全血中的红细胞的方法。本发明可广泛应用于临床检验和医学科学研究等大量使用人全血标本的领域。

发明背景

血液标本是临床和科研使用最多的标本，但一般仅限于去除红细胞的血清或血浆，因此在很多情况下需要对全血标本进行从中分离出红细胞的预处理。临床和科研上分离全血中的红细胞的方法有多种，包括自然沉降、离心、排阻过滤和吸附过滤等。这些方法各有特点，但都需要耗费较长的时间，操作较复杂。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种快速高效分离人全血红细胞的方法，特别是提供一种使用预包被植物凝集素或抗红细胞抗体的含有磁性材料的聚合物微球作为载体，从人全血中分离红细胞的方法。

本发明的另一个目的是提供一种分离人全血红细胞的装置，特别是提供了一种使用预包被植物凝集素或抗红细胞抗体的含有磁性材料的聚合物微球作为载体，将该载体与全血标本混合后，使用外置或内置永磁体或电磁体提供的磁力吸附作用，将吸附了红细胞的磁性微球从全血中分离开出来的装置。

本发明的分离方法包括以下步骤：将预包被了植物凝集素或抗红细胞抗体的磁性聚合物微球加到全血中并混合均匀达到均相互溶状态，然后利用永磁体或电磁体，将吸附了红细胞的磁性微球从全血中分离开出来。本方法的特征在于使用预包被植物凝集素或抗红细胞抗体的磁性聚合物微球，并使用磁力分相达到快速分离的目的。

本发明所说的“均相互溶状态”是指红细胞与全血中的其他成分处于均匀混和的状态。

本发明所说的“异相分离状态”是指红细胞在空间上富集在一起且与全血的其他绝大部分成分分开，处于相对分离的状态。

本发明提供一种快速高效分离人全血红细胞的方法，特别是提供一种使用预包被了植物凝集素或抗红细胞抗体的含有磁性材料的聚合物微球作为载体，借助外加磁力从全血中分离出红细胞的方法。

为了克服现有技术中的缺陷和不足，本发明提供了一个适于快速高效分离人全血中红细胞的方法，该方法包括：(1)将植物凝集素或抗红细胞抗体预包被于磁性聚合物微球上；(2)将微球加到人全血中并混合均匀；(3)利用磁力吸附具磁性的微球，吸附了红细胞的微球在磁力作用下从均相互溶状态转变为异相分离状态，从而达到分离全血红细胞的目的。

根据本发明的一个优选实施方案，其中所说的“人全血”是指从人体新鲜采集的，未经自然分离或人工分离的全血标本。

根据本发明的一个优选实施方案，其中所说的“植物凝集素”采用从红豆中提取的植物凝集素。

根据本发明的一个优选实施方案，其中所说的“抗红细胞抗体”是使用人红细胞免疫小鼠，常规制备的抗红细胞单克隆抗体。

根据本发明的一个优选实施方案，其中所说的“磁性聚合物微球”是平均直径为10—20微米，掺入了四氧化三铁的聚苯乙烯微球。

根据本发明的一个优选实施方案，其中所说的“磁力”是由永磁铁或电磁铁提供的。

根据本发明的一个优选实施方案，其中所说的植物凝集素来源于红豆提取物。将红豆用纯水洗净并浸泡约24小时后机械粉碎成乳浆状，然后离心(6000g，30min)分离上清并使用饱和硫酸氨法进一步提纯。

根据本发明的一个优选实施方案，可以按下述方法使用凝集素或抗红细胞抗体包被磁性聚合物微球：预先将磁性聚合物微球溶于PBS缓冲液(50mM，pH7.4)中(浓度为10％，m/v)，快速搅拌下加入凝集素或抗红细胞抗体并室温搅动(100转/分钟)反应30分钟，然后加入牛血清白蛋白(BSA)至终浓度0.2％，再次室温下搅动(100转/分钟)反应15分钟，最后10000g离心20分钟后弃上清，再用PBS缓冲液(50mM，pH7.4)重悬沉淀，即得到标记好的磁性聚合物微球溶液。

现针对本发明的几个主要步骤，分别详述如下：

1.将植物凝集素或抗红细胞抗体预包被于磁性聚合物微球上