[发明专利]一种胸腺素β4的固相合成方法

说明书

技术领域

本发明属于生物化学技术领域，涉及一种胸腺素β4的固相合成方法。

背景技术

胸腺素β4化学名：N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酰-天冬氨酰-蛋氨酰-丙氨酰-谷氨酰-异亮氨酰-谷氨酰-赖氨酰-苯丙氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-丝氨酰-赖氨酰-亮氨酰-赖氨酰-赖氨酰-苏氨酰-谷氨酰-苏氨酰-谷氨酰氨酰-谷氨酰-赖氨酰-天冬酰胺酰-脯氨酰-亮氨酰-脯氨酰-丝氨酰-赖氨酰-谷氨酰-苏氨酰-异亮氨酰-谷氨酰-谷氨酰胺酰-谷氨酰-赖氨酰-谷氨酰胺酰-丙氨酰-甘氨酰-谷氨酰-丝氨酸。

肽的序列为：

Ac-Ser-Asp-Lys-Pro-Asp-Met-Ala-Glu-Ile-Glu-Lys-Phe-Asp-Lys-Ser-Lys-Leu-Lys-Lys-Thr-Glu-Thr-Gln-Glu-Lys-Asn-Pro-Leu-Pro-Ser-Lys-Glu-Thr-Ile-Glu-Gln-Glu-Lys-Gln-Ala-Gly-Glu-Ser-OH

分子式：C₂₁₂H₃₅₀N₅₆O₇₈S

分子量：4963.49

Thymosin-β4是肌动蛋白的隐蔽蛋白，作为肌动蛋白解聚和重聚的的动力原，调控肌动蛋白的动力学变化，影响一些蛋白分子的合成与表达。Thymosin-β4广泛分布在胚乳动物包括神经系统在内的组织之中，在不同系统之中发挥不同的生物学作用，在神经系统生长发育和损伤过程中都有较高的表达，现研究发现：它可以参与突触的形成、轴突生长、细胞的迁移、调节树突野可塑性的变化等生物学过程。

1963年，R.B.Merrifield创立了将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸，延长肽链、合成蛋白质的固相合成法。多肽的固相合成与液相合成相比优点在于(1)大大简化了反应后处理操作：不溶性载体键合的聚合物只要简单的反复过滤和洗涤，即可从可溶性的溶剂和副产物中分离出来，省时，省力；(2)可充分利用热力学和动力学因素促进反应：可溶性试剂可以过量以使反应完全和获得高产率，过量的试剂可简单的用溶剂冲洗，过滤清除；(3)逐步合成更为简化，因为所有的反应都可以在一个容器中进行，因而也避免了反应中间体转移的手续和损失；(4)树脂再生，如果选择适当的链接分子和裂解条件，高分子树脂可再生重复使用。但是对于大于30个氨基酸的长链肽来说，固相逐一连接氨基酸会遇到一些比较严重的问题，肽在达到一定的长度和条件后，会在固相树脂载体上产生折叠或者片层等二级结构，肽链产生交联或者聚合，使得活性氨基位点被深藏或包埋，从而增加了位阻，大大影响氨基酸的缩合率，另外逐一偶联所需要的反应时间冗长，氨基酸消旋的几率也相应极大的增加，从而使得产物中杂质多并且异常难以纯化。

发明内容

本发明目的是提供一种反应时间短、缩合率高、易于纯化、产物纯度高的胸腺素β4的固相合成方法。

本发明采用的技术方案是：

一种胸腺素β4的固相合成方法，其特征在于所述方法为：(1)以所述胸腺素β4的肽链自N端连续切分得到的8～12个氨基酸长度的片段D、片段C、片段B、片段A作为固相分段合成目的片段，以王树脂为固相载体，依次进行缩合反应连接保护氨基酸，得到A肽全保护树脂；分别以2-chlorotrityl chloride resin为固相载体，依次进行缩合反应连接保护氨基酸，得到片段B肽全保护树脂、片段C肽全保护树脂和片段D肽全保护树脂；(2)分别切割片段B肽全保护树脂、片段C肽全保护树脂和片段D肽全保护树脂，得到片段B全保护肽、片段C全保护肽和片段D全保护肽；(3)依次将片段B全保护肽、片段C全保护肽和片段D全保护肽连接至A肽全保护树脂，得到胸腺素β4的全保护肽树脂；(4)用醋酸酐乙酰化胸腺素β4的全保护肽树脂，用三氟乙酸切割树脂，得到粗肽；(5)粗肽溶于5％醋酸水溶液，经C₁₈填料的反相高效液相色谱柱纯化，洗脱、浓缩、干燥，得到所述胸腺素β4。

所述及的王树脂化学结构为：

所述及的2-chlorotrityl chloride resin结构如下：