[发明专利]通过发酵制备精细化学品的方法

权利要求书

1.增加微生物中通过戊糖磷酸途径的代谢通量的方法，其包括在一定条件下培养包含经失调的基因的微生物使得通过戊糖磷酸途径的代谢通量增加。

2.权利要求1的方法，其中将果糖或蔗糖用作碳源。

3.权利要求1的方法，其中将果糖用作碳源。

4.权利要求1的方法，其中所述基因是果糖-1，6-二磷酸酶。

5.权利要求4的方法，其中果糖-1，6-二磷酸酶基因来自棒杆菌。

6.权利要求4的方法，其中过表达果糖-1，6-二磷酸酶基因。

7.权利要求1的方法，其中所述基因编码果糖-1，6-二磷酸酶。

8.权利要求7的方法，其中果糖-1，6-二磷酸酶具有增加的活性。

9.权利要求1的方法，其中所述微生物是革兰氏阳性微生物。

10.权利要求1的方法，其中所述微生物属于棒杆菌属。

11.权利要求10的方法，其中所述微生物是谷氨酸棒杆菌。

12.权利要求1的方法，其中发酵所述微生物以产生精细化学品。

13.权利要求1的方法，其中所述微生物还包含一种或多种额外的失调的基因。

14.权利要求13的方法，其中所述一种或多种额外的失调的基因选自ask基因、dapA基因、asd基因、dapB基因、ddh基因、lysA基因、lysE基因、pycA基因、zwf基因、pepCL基因、gap基因、zwa1基因、tkt基因、tad基因、mqo基因、tpi基因、pgk基因、和sigC基因。

15.权利要求14的方法，其中过表达所述一种或多种额外的失调的基因。

16.权利要求13的方法，其中所述一种或多种额外的失调的基因编码选自抗反馈天冬氨酸激酶、二氢吡啶二羧酸合酶、天冬氨酸半醛脱氢酶、二氢吡啶二羧酸还原酶、二氨基庚二酸脱氢酶、二氨基庚二酸差向异构酶、赖氨酸输出蛋白、丙酮酸羧化酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、RPF蛋白质前体、转酮酶、转醛酶、menaquinine氧化还原酶、丙糖磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸激酶、和RNA-聚合酶σ因子sigC的蛋白质。

17.权利要求16的方法，其中所述蛋白质具有增加的活性。

18.权利要求13的方法，其中所述一种或多种额外的失调的基因选自pepCK基因、mal E基因、glgA基因、pgi基因、dead基因、menE基因、citE基因、mikE17基因、poxB基因、zwa2基因、和sucC基因。

19.权利要求18的方法，其中减弱、减小或抑制所述一种或多种额外的失调的基因。

20.权利要求13的方法，其中所述一种或多种额外的失调的基因编码选自烯醇丙酮酸磷酸羧激酶、苹果酸酶、糖原合酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、依赖ATP的RNA解旋酶、邻-琥珀酰基苯甲酸-CoA连接酶、柠檬酸裂合酶β链、转录调节子、丙酮酸脱氢酶、RPF蛋白质前体、和琥珀酰CoA合成酶的蛋白质。

21.权利要求20的方法，其中所述蛋白质具有减小的活性。

22.产生精细化学品的方法，其包括：

a)培养其中果糖-1，6-二磷酸酶被失调的微生物；和

b)在培养基或者微生物的细胞中积累所述精细化学品，从而产生精细化学品。

23.产生精细化学品的方法，其包括在一定条件下培养其中至少一种戊糖磷酸生物合成途径基因或酶被失调的微生物从而产生精细化学品。

24.权利要求23的方法，其中所述生物合成途径基因是果糖-1，6-二磷酸酶。

25.权利要求23的方法，其中所述生物合成途径酶是果糖-1，6-二磷酸酶。

26.权利要求22或24的方法，其中果糖-1，6-二磷酸酶表达增加。

27.权利要求22或25的方法，其中果糖-1，6-二磷酸酶活性增加。