[发明专利]一种移卵管及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于小鼠胚胎移植领域，具体涉及一种移卵管及其制备方法和用途。

背景技术

转基因动物是指以实验方法导入外源基因，在染色体组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。自从1982年Palmiter等将带有小鼠MT启动子的大鼠生长激素基因(RGH)导入小鼠受精卵，成功获得比同窝对照组生长快近两倍的转基因小鼠以来，转基因动物技术已经广泛应用于基因功能的体内研究、动物疾病模型的建立、新药的评价、生物反应器等前沿领域。转基因小鼠由于繁殖快，饲养方便，成本相对低廉等优点使之成为了科研领域首选的动物模型。

目前认为，广义上的转基因小鼠包括基于原核注射的转基因小鼠和基于胚胎干细胞操作技术的基因敲除小鼠。但是无论是建立哪种小鼠模型，都必须要经过胚胎移植这个关键步骤，因此胚胎移植技术对于实验动物学研究及生命科学研究具有重要作用。人类用小鼠进行发育生物学研究，包括胚胎的发生、发育、突变基因的研究、转基因动物的研究、基因打靶技术及小鼠胚胎冷冻种子库技术等涉及胚胎体外操作的各种研究，均需要通过把胚胎移植入代孕母体内来完成。按照胚胎发育的阶段不同，移植部位也不同：1～2细胞期胚胎进行输卵管移植，8细胞期至桑椹胚期胚胎进行子宫移植。

输卵管移植目前主要采用的是输卵管伞部移植法和输卵管壁移植法(参见小鼠胚胎操作实验指南  A.纳吉[加]，M.格斯滕斯坦[加]，K.文特斯滕[德]，R.贝林杰[美]  科学出版社2004年1月)。输卵管伞部移植法是指代孕母鼠经过麻醉后，切开皮肤和肌肉，暴露出输卵管和卵巢部，用眼科镊小心撕开输卵管开口末端伞部上方的卵巢膜，将平端的玻璃移卵管中1细胞或者2细胞时期的受精卵通过伞口移植进入输卵管的壶腹部，最后把卵巢部轻轻推入小鼠体内，缝合消毒伤口。这种方法最早由Tarkowski于1959年发明，沿用至今已经成为一种经典常规的输卵管移植方法，具有较好的胚胎移植成功率(大约55％)。但是此法也存在以下缺点：(1)对操作人员的操作技术要求较高，熟练掌握需要至少三个月到半年的练习时间；(2)移植过程中游离的输卵管伞部开口不容易找到；(3)撕卵巢膜的时候容易弄破卵巢膜上的毛细血管，造成大量出血，影响下一步操作；(4)移植进去的胚胎由于输卵管内压增大，容易从输卵管伞部端口漏出，影响整个移植成功率。

基于输卵管伞部移植法的上述问题，又衍生出了输卵管壁移植法，即利用刀片或者注射器针头直接在输卵管壶腹部穿刺出一个小口，使用平端的玻璃移卵管通过小口插入输卵管壶腹部把胚胎吹入壶腹部内，代替通过输卵管伞部的开口进行胚胎移植。这种方法避免了撕开卵巢膜，从而有效避免了出血，而且不用在寻找输卵管开口上浪费时间，相对于输卵管伞部移植法更容易掌握。但是，此法也存不足之处：(1)在壶腹部开口时开口的大小不容易控制，容易造成移植进去的胚胎从切口部位漏出；(2)插入移卵管时事先开口的位置不易找到，寻找开口所在位置会耽误移植手术时间，影响移植操作；(3)会对受体造成较大的损伤和痛苦，对其生长和生活不利，也会影响所移植胚胎的最后发育情况。子宫移植的方法在操作上和输卵管壁移植法相似，只是开口部位在子宫壁上，但同时也存在胚胎漏出的问题。

由上可见，本领域目前急需解决上述问题以提高移植成功率，减少胚胎漏出的数量和对受体的伤害。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提高小鼠胚胎移植成功率，减少胚胎漏出的数量和对受体的伤害。

本发明解决该技术问题的技术方案是提供了一种移卵管。该移卵管包括把持部和毛细端，其特征在于：在毛细端的前端设置有一斜口。

其中，上述斜口的角度为40～50度。

进一步的，上述移卵管由玻璃制成。

更进一步的，上述移卵管在其斜口上还有一尖部。

其中，上述尖部的长度为20～40μm。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种制备上述移卵管的方法。该方法包括以下步骤：

a、选择玻璃管拉制成具有把持部和毛细端且前端平齐的移卵管；

b、在磨针仪上把毛细端的前端磨制成斜口。

其中，上述方法还包括步骤c：在斜口磨成后，用烧针仪把移卵管斜口的前端加热，然后拉制出一尖部，即得。

进一步的，上述方法还包括步骤d：拉制尖部成功后，再用烧针仪烧制，使斜口与尖部过渡平滑。

本发明所要解决的第三个技术问题使提供上述移卵管在小鼠胚胎移植中的用途。

其中，上述的小鼠胚胎移植是通过输卵管壁移植或子宫壁移植进行。