[发明专利]Asia 1型口蹄疫抗体水平检测试纸及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速检测用的检测物，具体讲是一种用于偶蹄类动物Asia 1型口蹄疫抗体水平进行快速检测的试纸条，这种试纸条的制备，以及用这种纸条对偶蹄类动物Asia 1型口蹄疫抗体水平进行具体检测的方法。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-Mouth，FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疫病。侵染对象是猪、牛、羊等主要畜种及其他家养和野生偶蹄动物，易感动物多达70余种。口蹄疫的发病率为100％，爆发可使农场破产，发病地区和国家的畜牧业乃至整个国民经济遭受巨大打击。因此，世界动物卫生组织(OIE)将该病列在15个A类动物疫病之首，我国政府也将口蹄疫排在14个一类动物传染病的第一位。

鉴于口蹄疫可造成的巨大经济损失和社会影响，各国政府都非常重视口蹄疫的防治研究，我国也有专门的机构研究口蹄疫。但口蹄疫病毒的变异性极强，目前有7个血清型，Asia I型被发现的最晚，因其血清型病毒分离于亚洲而得以冠名。尽管Asia I型口蹄疫在世界已流行近50年，但基本只流行于亚洲较贫穷国家，由于这些国家的经济实力与科技水平较低，对Asia I型的流行传播特点及病毒生物学特征研究较少，有参考价值的资料缺乏。目前Asia 1型口蹄疫的流行呈现上升趋势，简单、快速、有效的免疫抗体水平监测方法，是防治口蹄疫爆发和流行的保障，也是制定口蹄疫免疫程序的重要依据。由于口蹄疫病毒7种血清型间不能交叉免疫，等于面对7种不同的传染病。同型内不同的病毒株的抗原性也不同，而新毒株又不断出现，这就使得口蹄疫的防治包括疫苗防治工作产生极大的困难。

现采用的抗体检测方法主要有CFT、VNT、凝集试验、免疫扩散和ELISA等，其中最常用于FMDV抗体检测的方法是VNT和ELISA方法。VNT诊断FMD方法准确、可靠，但要动用活毒，需要在专门的实验室进行试验，而且工作量大、实验周期长。液相阻断ELISA具有与VNT相同的灵敏度和特异性，且重复性好，尤其适合于大批量血清样品的检测。是国际认可的一种标准化诊断技术。但该方法同样操作繁复，而且需要相应的检测设备才能判定结果，面对我国基层检测机构及广大的畜禽养殖场缺少检测设备与专业技术人员的现状，发展一种快速、简便、无需专业人员和仪器，可在野外、田间进操作的新型诊断方法已成为一项急需解决的课题。

中国发明专利申请200610043143.6公开了一种口蹄疫病毒定型试纸条及其制备和使用方法。该专利申请是由O、A、Asia I、C四种血清型检测试纸条组成，试纸条由PVC衬板、硝酸纤维素膜、吸收垫、金标垫、样品垫部分组成，所述PVC衬板设在最底部，衬板上部中段设有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上部左端贴有吸收垫，硝酸纤维素膜上部右端设有金标垫，金标垫的上部右端设有样品垫。该试纸条可以用于确定口蹄疫病毒的O、A、Asia I、C型四种血清型抗原，以确定被检动物是否感染口蹄疫病毒。该试纸条操作快速简便，判定直观容易，结果敏感特异，费用低廉，运输保存方便，非常适用于基层人员在田间检测使用。但这一专利申请所公开的试纸条却无法检测被检动物经人工免疫或自然免疫产生抗体的水平，以及免疫动物抗体与保护力的关系。

由于FMD流行带来的严重危害性，目前发达国家大多采取扑杀销毁的措施，而发展中国家以疫苗免疫接种为主要手段。FMDV抗原变异频繁，亚型之间的抗原差异性也很大，因此往往造成诊断困难。制备诊断抗原应近可能与FMDV的分子流行病学的研究为基础。

为避免口蹄疫病毒的大面积流行，对人工饲养的偶蹄类动物进行人工免疫是现发展中国家多采用的方法。经人工免疫后，被免疫动物是否产生抗体，能否有效抵抗病毒的感染，需要提供一种有效快捷的手段进行检测。

口蹄疫疫苗免疫动物血清抗体效价与攻毒保护具有相关性，已在国内外许多实验室得到验证，数十年前就证实了免疫动物中和抗体滴度与攻毒保护有很好的相关性，其最高的相关性在免疫后3-4周的牛和猪血清抗体检测中得到验证，后期要达到与前期相同的保护程度，则需要加强免疫，获得更高的抗体滴度。因此确定免疫动物抗体效价与保护力的关系，对于田间动物的免疫效力评价具有实际意义。

发明内容

本发明提供一种可克服现有技术不足，可以以对偶蹄类动物亚洲1型(Asia1)口蹄疫抗体水平进行快速检测的试纸条，同时提供这种试纸条的制备方法和使用方法。