[发明专利]常压加长两段层析柱系统及其在葛根素糖基化衍生物分离制备中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种层析柱系统，具体是常压加长两段层析柱系统及其在葛根素糖基化衍生物分离制备中的应用。

背景技术

葛根素(puerarin)，4′，7-二羟基-8-β-D-葡萄糖基异黄酮(8-C-β-D-Glucopyranosyl-7，4′-hydroxy-Isoflavone)(结构如式A)，临床上被广泛应用于心脑血管系统疾病(如心绞痛、心肌梗死、心律失常、冠心病、心力衰竭、椎-基底动脉供血不足、高黏血症、高血压、脑血栓、脑水肿等)、糖尿病、眼底疾病(如视网膜动脉栓塞、单纯性青光眼)、突发性耳聋、急性酒精中毒、拟菊酯类农药中毒及肿瘤的治疗。但存在如下缺点：1)体内消除速率快，临床使用剂量较大，口服生物利用度低；2)水溶解度低，注射制剂大多含有助溶剂以增加制剂的稳定性，但助溶剂的使用易产生一定的毒副作用，致使用药安全性降低。为了改善葛根素的水溶性，进而改善其药理活性、提高其生物利用度，我们利用氧化微杆菌(Microbacteriumoxydans)CGMCC 1788所含糖基化酶对葛根素进行糖基化修饰，获得了葛根素-7-O-葡萄糖苷(结构如式B)。

葛根素-7-O-葡萄糖苷水溶性明显提高，在体内存留时间延长，血管舒张活性有所改善，有望开发成为新的葛根素药物。但葛根素经氧化微杆菌静息细胞转化后得到的转化液成分复杂，其中含有糖基化葛根素，葛根素，磷酸盐，蔗糖，菌体代谢产物等。特别是葛根素与糖基化葛根素结构相似，分离比较困难。采用现有的葛根素纯化常用的大孔吸附树脂普通层析柱层析法并不能有效地将转化产物与葛根素相分离。

发明内容

为了有效提高层析柱的分离因素和塔板数，本发明提供了一种常压加长两段层析柱系统，以有效增加层析柱的理论塔板数，结果显示大大提高了层析的分离效率，从而达到了从葛根素转化液中分离制备糖基化葛根素的目的。

本发明所述的常压加长两段层析柱系统，其特征在于，在普通层析柱的后面，有一个可拆卸的外接加长层析柱，所说的外接加长层析柱，由柔性管材制成。在使用时，采用普通湿法装柱法向普通层析柱和外接加长层析柱中分别装填预处理好的树脂。填充外接加长层析柱时，先将该柱从高处垂下使该柱伸展，分批装填树脂直到填满自然沉降压实，然后将外接加长层析柱盘旋起来备用。层析时，用平衡溶液将层析柱系统充分平衡后，将外接加长层析柱与普通层析柱分离，将含待分离物质的混合物溶液先流过普通层析柱进行吸附，然后用平衡溶液洗涤普通层析柱去除未吸附物质，将外接加长层析柱接到普通层析柱出口处，用洗脱液开始洗脱，分部收集洗脱液并检测，将相同洗脱峰的收集液合并。利用该法采用大孔吸附树脂分离葛根素糖基化衍生物混合液，用低浓度的乙醇梯度洗脱，可有效地将葛根素与糖基葛根素相互分离，分离产物纯度达到90％以上，产品回收率达到80％以上。

上述常压加长两段层析柱系统中，所说的外接加长层析柱是由一根柔性管材制成，其材质可以是聚乙烯，聚氯乙烯，聚丙烯等各种塑料管，也可以是乳胶管，硅胶管，橡胶管等，但必须要有足够的柔软性，能够随意盘绕卷曲；其长度至少要达到与外接加长柱相连的普通层析柱的2倍以上，实际长度依据分离物质需要确定；其直径可与相连的普通层析柱相同，也可比相连的普通层析柱略粗或略细。

上述的常压加长两段柱层析系统在装填树脂时，需要将普通层析柱和外接加长层析柱分开，采用普通湿法装柱法分别向普通层析柱和外接加长层析柱填入预处理好的树脂；填充外接加长层析柱时，先将该柱从高处垂下使柱充分伸展，分批装填树脂直到填满自然沉降压实，然后将外接加长层析柱盘旋起来备用。

上述的常压加长两段柱层析系统所装填的树脂可以是极性或非极性吸附剂，如硅胶，氧化铝，大孔树脂，活性炭，硅藻土；可以是疏水性吸附剂，如Phenyl-Sepharose；可以是离子交换树脂，如amberlite系列离子交换树脂、dowex系列离子交换树脂、duolite系列离子交换树脂，asmit系列离子交换树脂、diaion系列离子交换树脂、ionac系列离子交换树脂、allassion系列离子交换树脂。

上述的常压加长两段柱层析系统在层析时，需要将外接加长层析柱与普通层析柱分离，将含待分离物质的混合物溶液先流过普通层析柱进行吸附，接着用平衡溶液洗涤普通层析柱去除未吸附物质后，再将外接加长层析柱接到普通层析柱出口处，进行洗脱分部收集。