[发明专利]一种可溶性融合蛋白

说明书

技术领域

本发明涉及一种可溶性融合蛋白，具体地讲它是人Notch配体Delta-like1即hDLL1的一种新型可溶性截短体蛋白，它由硫氧还蛋白即TRX及与TRX蛋白C末端相融合的重组hDLL1蛋白组成。

背景技术

Notch信号途径广泛存在于多种生物体内，且进化上高度保守，在胚胎发育、血细胞发育及肿瘤形成等多种病理生理过程中发挥重要作用。

现已在哺乳动物中发现了4种Notch同源分子，Notch 1～4，5种Notch配体，分别是Jagged1、2和Delta-like1、3、4。这些配体都是I型跨膜蛋白，N端有一个结合Notch受体必需的DSL基序，其由含6个半胱氨酸，3个甘氨酸的45个氨基酸组成；配体胞外区还含有数量不等的EGF样重复区；胞浆区很短，只有70-215个氨基酸残基，其保守性差。其中，hDLL1属于果蝇delta配体在人的同源物，由723个氨基酸组成，其胞外段中有1个DSL基序和8个EGF样重复区(Freddy Radtke等，EMBO reports，2005，6：1120-1125；Sabine Pfister等，J.Mol.Biol.2003，333(2)：229-35；J.M.Ascano等，J.Biol.Chem.2003，278：8771-8779)。

Notch信号途径的活化主要采用三步蛋白水解模式(Martin Baron，SeminCell.Dev.Bio-l.2003，14(2)：113-9)。全长Notch分子是新合成的胞内非活化分子，在分泌运输中，首先被高尔基体内Furin样蛋白酶酶切，酶切位点位于临近Notch跨膜区的胞外段S1，酶切形成ECN(Extracellular Notch Subunit)和NTM(Notchtransmembrane subunit)，通过一种Ca²⁺依赖的非共价键结合而形成分子内异二聚体，转运至细胞膜成为成熟的Notch受体。当配体与受体结合后，NTM上的S2位点暴露，通过ADAM金属蛋白酶家族TACE或Kuz酶切，Notch受体释放ECN，粘连在细胞膜上的成为NEXT(Notch Extracellular Truncation)或Notch-intro TM。第三步酶切发生在跨膜区，由γ分泌酶复合物催化，在位点S3，S4酶切释放胞内段NICD(Intracellular Domain of Notch)和Nβ。S1酶切是组成性的，配体与受体结合触发S2、S3酶切从而激活Notch信号途径。

Notch受体和配体都属于EGF样超家族分子，EGF样重复区的功能可能有两方面，其一介导与邻近细胞表面分子的相互作用，其二介导同一细胞表面分子侧向的相互作用(M.Balzar等，Mol.Cell.Biol.2001，21：2570-2580)。如Notch 1的第11-12个EGF样重复区与配体DSL结构域相互作用激活Notch信号途径(I.Rebay等，Cell，1991：67687-699)。但对配体的EGF样重复区的功能研究发现，配体从N末端到DSL结构域的片段足以激活Notch信号途径(Fitzgerald K等，Development，1995，121：4275；Henderson ST.等，Mol.Biol.Cell.1997，8：1751；Annette.L.Parks等，Genetics，2006，174：1947-1961)。

目前体外研究Notch信号对细胞增殖、分化和凋亡的作用多采用Notch配体刺激。Notch配体表达系统分真核表达系统和原核表达系统。真核表达绝大多数是哺乳动物细胞系，如CHO，COS7等，表达配体的整个胞外区与人IgG的Fc融合蛋白，可以以亲和层析一步纯化，但由于哺乳动物细胞表达系统成本高、难操作、表达水平低，产量受限制。而原核表达系统，易操作，成本低，表达水平高，但目前难以表达整个胞外区，而表达的截短体多以包涵体形式存在，这使纯化过程复杂化。因此有必要在提高产量、降低成本的同时简化纯化步骤。

发明内容

本发明的目的是提供了一种可溶性融合蛋白，它实现了在原核表达系统中的可溶性表达，并且它具有生物学活性；此可溶性hDLL1截短体融合蛋白提供体外研究Notch信号是对细胞增殖、分化和凋亡的影响重要手段。

本发明的技术方案是，提供一种可溶性融合蛋白，其特征是：它由硫氧还蛋白即TRX及与TRX蛋白C末端相融合的重组人Delta-like1即hDLL1蛋白组成。