[发明专利]一种人参茎段快速诱导不定芽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种人参组织培养中快速诱导不定芽的方法，具体是以人参无菌苗的茎段为外植体，在培养基上进行培养，快速获得人参不定芽的方法。

背景技术

人参(Panax ginseng C.A.Mey.)为五加科人参属多年生草本植物，是名贵的中药材，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津安神之功效，在临床医学上可用于治疗体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心原性休克等多种疾病，同时人参在保健食品、保健化妆品中的应用也越来越广泛。

人参喜阴凉、湿润的气候，多生长于海拔500～1100米山地缓坡或斜坡地带的针阔混交林或杂木林中，由于自然繁殖缓慢，采挖过于频繁，野生资源已很稀少，目前已被列为国家珍稀濒危保护植物。随着人们生活承平的提高，对人参的需求量也越来越大，野生人参资源已远远不能满足市场的需求，人工栽培人参的价格也随之水涨船高。

目前对于人参培养方面的研究主要集中于细胞培养，人参细胞和毛状根悬浮培养和人参皂苷的生产已被广泛研究，中国专利87102382.2研究了人参细胞静止培养的方法；中国专利94105427.6研究了人参组织和细胞富锗培养。人参组织培养的研究尚不多见，中国专利86106832和89106227.0公开了以人参根为外植体，通过愈伤诱导和不定胚发生的手段获取人参再生植株的方法，然而通过愈伤培养再生植株的途径步骤复杂，耗时长。本发明以人参茎段为外植体，通过直接器官发生的手段直接获取人参不定芽，大大简化了人参组培苗获取的流程。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种人参组织培养中快速诱导不定芽的方法，该方法以人参茎段为外植体，通过器官发生的手段直接获取人参不定芽，简化了人参组培苗获取的流程，为人参人工种植规模化组培育苗提供一种有效的途径，大大缩短人参育苗的时间和成本。

本发明所述的一种人参茎段快速诱导不定芽的方法，该方法为在附加激素的MS培养基上进行茎段培养，诱导形成不定芽，再将不定芽继续在附加激素的MS培养基上进行扩繁，具体操作按下列步骤进行：

a、选取成熟的人参种子，表面消毒后接种于1/2MS培养基上，培养30-45天获取人参无菌苗；

b、将人参无菌苗切除叶片和根部，把茎段切成1-2cm长的小段，插入附加激素的MS培养基上进行茎段培养，诱导形成不定芽，培养时间为20-30天，温度为20-25℃，湿度为40-60％，光照强度为2000-2500lux，光照时间为14小时/天；

c、将诱导形成的不定芽转移至附加激素的MS培养基上进行扩繁，继代周期为20-25天，培养温度为20-25℃，湿度为40-60％，光照强度为2000-2500lux，光照时间为14小时/天即可。

步骤b不定芽诱导培养基为MS+蔗糖3％+2，4-D 0.1-0.3mg/L+NAA 0.1-1.0mg/L+6-BA 0.5-2.0mg/L+琼脂0.6-0.8％，pH值为5.8-6.0。

步骤c不定芽扩繁培养基为MS+蔗糖3％+NAA 0.1-1.0mg/L+6-BA0.5-2.0mg/L+琼脂0.6-0.8％，pH值为5.8-6.0。

步骤a人参种子消毒条件为75％乙醇浸泡25-35秒，无菌水冲洗3-5次，0.1-0.2％的HgCl₂溶液浸泡6-10分钟，再用无菌水冲洗3-5次。

本发明以人参茎段为外植体，通过直接器官发生的途径直接诱导出芽，由外植体直接分化出不定芽，省略了愈伤组织诱导培养过程，速度快，一般经25天左右即可完成不定芽的诱导过程，再生频率较高，变异率较低，周期相对较短，而且未经脱分化的细胞直接分化芽，因此体细胞无性系变异小，能较好地保持受体植物的遗传稳定性，转化的外源基因也能实现稳定地遗传，受基因型的限制较小，是大规模获得人参组培苗的有效手段。

附图说明

图1为人参茎段诱导不定芽的发生图

图2为不定芽的扩繁图

具体实施方式

实施例1

a、选取人参种子10粒，在超净工作台上用75％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗4次，0.1％的HgCl₂溶液浸泡8分钟，再用无菌水冲洗4次，接种至1/2MS培养基上培养35天，使种子萌发，形成人参无菌苗；