[发明专利]与甜瓜白粉病抗性基因Pm-2F紧密连锁的特异片段及其获得方法有效
申请号: | 200710178022.7 | 申请日: | 2007-11-23 |
公开(公告)号: | CN101440366A | 公开(公告)日: | 2009-05-27 |
发明(设计)人: | 许勇;苏芳;张海英;郭绍贵;宫国义 | 申请(专利权)人: | 北京市农林科学院 |
主分类号: | C12N15/29 | 分类号: | C12N15/29 |
代理公司: | 北京北新智诚知识产权代理有限公司 | 代理人: | 程凤儒 |
地址: | 100097北京*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 甜瓜 白粉病 抗性 基因 pm 紧密 连锁 特异 片段 及其 获得 方法 | ||
技术领域
本发明涉及与甜瓜白粉病抗性基因Pm-2F紧密连锁的特异片段及其获得方法,属于生物技术领域。
背景技术
甜瓜为葫芦科黄瓜属(Cucumis melo L.)一年生蔓生草本植物,是一种国内外广泛栽培的重要经济作物。我国已有3000多年的甜瓜栽培历史,是世界上最早栽培甜瓜的国家之一,也是目前世界上甜瓜栽培面积最大、产量最高的国家。
白粉病是危害甜瓜生产的一种世界性病害,在许多国家和地区都有发生,严重影响甜瓜的产量和品质,甚至会造成绝产,引起了世界各国的广泛重视。白粉病主要由瓜单囊壳菌(Sphaerotheca fuliginea)和二孢白粉菌(Erysiphe cichoracearum)引起。目前人们已较深入地对病原菌的致病性、传播途径、预防措施等进行了研究,也为寻找相关抗源基因做了大量工作,但白粉病菌的危害还是有不断发展的趋势,开展抗病品种的选育是解决这一问题的有效途径。因此,对瓜类白粉病抗病育种的研究已成为育种工作的主要目标之一。
传统育种方式费时费力,需要非常大的群体对白粉病菌的抗性进行严格筛选。利用与抗病性状紧密连锁的特异标记片段进行品种筛选,可大大缩短传统育种的研究周期,加速目标基因的转移。目前,与抗病性状紧密连锁的特异标记片段的获得主要来源于各种分子标记技术,如随机扩增多态性DNA(RAPD)、扩增片段长度多态性(AFLP)、微卫星DNA或简单重复序列(SSR)、特异序列扩增(SCAR)、单核苷酸多态性(SNP)等。其中,RAPD和AFLP标记技术检测易受环境条件的影响而造成实验结果重现性差,SCAR和SNP标记技术需要利用已知DNA序列设计特异引物进行扩增,而SSR标记技术具有重复性好,标记稳定可靠,便于统计等优点,是目前实际应用中比较稳定的标记工具,而且利用SSR标记技术获得的特异片段序列也是开发SCAR和SNP等其他分子标记的重要基础。因此,本项研究拟利用SSR标记技术寻找与甜瓜白粉病抗性基因紧密连锁的特异标记片段,这将是今后进行甜瓜白粉病抗性分子育种的基础,而由此获得的扩增序列又是开发SCAR和SNP等特异分子标记的基础。
发明内容
本发明的目的在于提供一种与甜瓜白粉病抗性基因Pm-2F紧密连锁的特异片段,该特异片段可用于甜瓜抗白粉病分子标记辅助育种中。
本发明的另一个目的是提供这种特异片段的获得方法。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种与甜瓜白粉病抗性基因Pm-2F紧密连锁的特异片段,其具有序列表中SEQ ID NO:1~4所述的DNA序列。
序列表中SEQ ID NO:1为抗病特异扩增片段SSR509-172的序列;
序列表中SEQ ID NO:2为抗病特异扩增片段SSR510-98的序列;
序列表中SEQ ID NO:3为感病特异扩增片段SSR509-170的序列;
序列表中SEQ ID NO:4为感病特异扩增片段SSR510-104的序列。
一种与甜瓜白粉病抗性基因Pm-2F紧密连锁的特异片段的获得方法,所述方法包括如下步骤:
(1)与甜瓜白粉病抗性基因Pm-2F紧密连锁的特异片段的筛选:提取基因组DNA,使用SSR引物对基因组DNA进行PCR反应,对PCR产物进行电泳分析;通过BSA法,寻找与甜瓜白粉病抗性基因Pm-2F紧密连锁的特异SSR片段,测定连锁距离并验证连锁关系;
(2)与甜瓜白粉病抗性基因Pm-2F紧密连锁的特异扩增序列的获得:对SSR产物进行回收、克隆和测序,获得特异片段序列。
上述的一种与甜瓜白粉病抗性基因Pm-2F紧密连锁的特异片段的获得方法,所述步骤(1)中SSR引物为SSR引物509和SSR引物510;
所述SSR引物509上游引物序列为:5’-CTGGCCCCCTCCTAAACTAA-3’,509下游引物序列为5’-CAAAAAGCATCAAAATGGTTG-3’。
所述SSR引物510上游引物序列为:5’-TTTCACTTTTTCCCGCCG-3’,510下游引物序列为5’-AATGGAAAAGGGAAGTGCAA-3’。
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