[发明专利]一种鉴定A型流感病毒的受体亲和特性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鉴定A型流感病毒的受体亲和特性的方法。

背景技术

流感病毒感染宿主靶细胞的首要条件是与宿主细胞结合，病毒与细胞表面受体特异性的结合能力决定了流感病毒种间传播的潜能。这种结合是由病毒的血凝素和细胞表面的糖蛋白(或糖脂)上的糖链末端的唾液酸受体所介导的，是影响病毒组织嗜性和宿主感染谱的重要因素。宿主细胞表面所带有的特定受体决定着流感病毒感染宿主的潜能。其中，禽流感病毒优先与禽上呼吸道和肠道上皮细胞表面的唾液酸-α2，3-半乳糖(sialic acid-a2，3-galactose，SAα2，3Gal))受体结合，而人流感病毒优先与人肺脏和上呼吸道上皮细胞表面的唾液酸-α2，6-半乳糖(sialicacid-a2，6-galactose，SAα2，6Gal)受体结合。近年来，禽流感病毒感染人的事实说明，禽流感病毒正在获得对人感染的能力，因而，研究禽流感病毒对组织受体的亲和性具有重要意义。

对病毒受体亲和特性的研究，可以帮助我们认识病毒种间传播的分子机制。病毒受体亲和特性鉴定方法的建立，不仅可以促进对流感病毒生物学特性的认识，而且可为今后研制病毒吸附抑制性药物提供理论基础。国外有学者利用一种类似夹心ELISA法的固相酶联试验来鉴定A型流感病毒的受体亲和特性，但其方法都是将病毒吸附在胎球蛋白上，因而降低了试验的特异性，而且实验方法的具体步骤尚未见详细报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴定A型流感病毒的受体亲和特性的方法。

本发明所提供的鉴定A型流感病毒的受体亲和特性的方法，包括以下步骤：

1)将待测A型流感病毒包被于酶标板；

2)然后向所述酶标板中加入生物素标记的唾液酸-α2，3-半乳糖受体和/或唾液酸-α2，6-半乳糖受体；

3)向所述酶标板中加入被亲和素标记的酶，所述酶为免疫酶技术中常用的酶，(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酯酶、β-D-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶或6-磷酸葡萄糖脱氧酶等)；

4)向所述酶标板中加入所述酶的底物进行显色反应；

5)终止反应，确定A型流感病毒的受体亲和特性。

所述步骤1)中还包括将所述待测A型流感病毒血凝素的阳性对照包被于所述酶标板上的步骤。

所述阳性对照具体可为朝鲜槐凝集素和/或接骨木凝集素。

所述待测A型流感病毒的包被浓度可为64-256个血凝单位/50μL，优选为128个血凝单位/50μL。

所述SAα2，3Gal受体和/或SAα2，6Gal受体可用含有体积百分含量为0.01％～0.05％的Tween 20和3μM神经氨酸酶抑制剂的PBS缓冲液稀释至0.5-3μg/mL后，再加入所述酶标板。

上述方法中，所述酶的使用浓度为500mU/mL。

所述朝鲜槐凝集素和接骨木凝集素的工作浓度均可为5μg/mL。

所述步骤1)中还包括将所述待测A型流感病毒的阴性对照包被于所述酶标板上的步骤；所述阴性对照为无菌PBS缓冲液。

本发明创造性地将待测A型流感病毒直接吸附于结合板上，通过固相直接结合方法来鉴定A型流感病毒受体亲和特性。该方法操作简单，敏感性高，特异性强，不但可用于病毒生物学特性的鉴定工作，还可为研制病毒吸附抑制性药物提供理论基础，具有极高的应用价值。

附图说明

图1A为不同浓度的A/turkey/Wisconsin/1966(Ty/WI/1966)(H9N2)与不同浓度的3’SL-PAA结合情况

图1B为不同浓度的A/turkey/Wisconsin/1966(Ty/WI/1966)(H9N2)与不同浓度的6’SL-PAA结合情况

图2为不同HA单位A/turkey/Wisconsin/1966(Ty/WI/1966)(H9N2)与不同浓度受体OD值之比图示

图3为A/turkey/Wisconsin/1966(Ty/WI/1966)(H9N2)的浓度为128HAU/50μL时，与受体结合比较图示

图4为MAA和SNA作为本发明方法的阳性对照与受体结合的结果

图5为PBS作为本发明方法的阴性对照与受体结合的结果

图6为A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)与受体结合比较图

图7为A/Swine/Henan/2/2004(Sw/HN/2/04)(H9N2)与受体结合比较图

具体实施方式

实施例1、鉴定A型流感病毒的受体亲和特性