[发明专利]一种膀胱癌检测试纸

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，特别是涉及一种膀胱癌的检测试纸。

背景技术

膀胱移行细胞癌(Bladder transitional cell carcinoma，BTCC)是我国最常见恶性肿瘤之一，为男性的第5位，女性的第6～7位。及早地发现、诊断膀胱癌对治疗和预后有重要的影响。目前膀胱癌诊断主要依赖于膀胱镜，但膀胱镜检查是一种侵入性操作，诊疗过程复杂、费时费力，费用较高，且病人痛苦难以耐受，很多病人因为畏惧膀胱镜检查而失去了及时诊断、治疗的机会。为此，找到一种简便、无创，价格低廉且高效的诊断方法迫在眉睫。

尿纤维连接蛋白(Fibronectin，FN)是一种广为研究的新的膀胱癌肿瘤标记物。研究表明尿液FN作为浸润性BTCC的诊断指标，诊断的灵敏度为76.47％～100％，特异度为87.22％，诊断正确率为86.96％。目前，尿FN的临床检测主要采用ELISA方法检测，尚存在以下问题：1、采用的ELISA试剂盒为不同厂家生产，缺乏标准化。2、步骤比较繁琐，结果易受操作者技术水平等的影响，不确定性因素较多。3、ELISA方法需要操作者具备一定的分子生物学技能，不易在基层医院开展。4、EIISA方法检测不但要求操作者具有一定的操作技能还必需酶标仪，因此病人无法在家中对自己的病情进行监测。

胶体纳米金免疫层析方法(Gold immunochromatography assay，GICA)是20世纪90年代兴起的一种将胶体金免疫技术和色谱层析技术相结合的固相膜免疫分析方法。其原理是将特异的抗原或抗体先固定于硝酸纤维膜的某一区带，该干燥的硝酸纤维素膜一端浸入样品(如尿液、血液、唾液等)后，由于毛细管作用，样品便会带着胶金垫上的金标抗体或抗原沿着硝酸纤维膜向前移动，当移动至固定有抗原或抗体的区域时，体系中发生抗原与抗体特异性结合反应，这一反应使胶体金在这一带聚集而显示出紫红色，从而实现特异性的免疫诊断。由这一技术开发出的胶体金检测试纸已广泛应用于临床诊断及药物检测，其种类包括：早孕类检测试纸(检测HCG、LH、FSH等)、传染病检测试纸(检测HIV、HCV、HBV、HBsAg等)、毒品、药物残留检测试纸(检测吗啡、可卡因、鸦片、大麻、摇头丸、瘦肉精等)等。

发明内容

所要解决的技术问题

本发明所要解决的技术问题是提供一种膀胱癌的检测试纸，以克服现有的膀胱癌检测中诊疗过程复杂、费时费力、费用较高，且病情难以自我监测等缺陷。

技术方案

本发明的技术方案之一是提供一种膀胱癌检测试纸，由样品垫、胶金垫、硝酸纤维膜、吸水纸和底板组成，在所述的硝酸纤维膜上有尿纤维连接蛋白-牛血清蛋白偶联物的检测区和抗鼠二抗的对照区，在所述的胶金垫上有金标抗尿纤维连接蛋白抗体，其中，所述的金标抗尿纤维连接蛋白抗体为粒径5-40nm的胶体。

上述的膀胱癌检测试纸的优选方案之一为，所述的金标抗尿纤维连接蛋白抗体是以如下方法制备的：将100mL 0.01％的HAuCl₄溶液加热至沸，在剧烈搅拌下迅速加入0.5-5mL的柠檬酸钠溶液，保持沸腾状态反应5-30min后关闭热源即得胶体金溶液，混合抗尿纤维连接蛋白抗体与胶体金溶液并使其结合，得到稳定的金标抗体。

上述的膀胱癌检测试纸的优选方案之二为，所述的胶金垫由玻璃纤维和固定其上的金标抗体组成。

上述的膀胱癌检测试纸的优选方案之三为，所述的样品垫为吸水性玻璃纤维层。

上述的膀胱癌检测试纸的优选方案之四为，所述试纸上具有至少一条质控线，其显色表示试纸有效。

本发明的技术方案之二是提供一种膀胱癌检测试纸的制备方法，依次包括如下步骤：

1)将100mL 0.01％的HAuCl₄溶液加热至沸，在剧烈搅拌下迅速加入0.5-5mL的柠檬酸钠溶液，保持沸腾状态反应5-30min后关闭热源即得胶体金溶液；

2)混合抗尿纤维连接蛋白抗体与胶体金溶液并使其结合，得到稳定的金标抗体；

3)将金标抗体固定在玻璃纤维上，制成胶金垫；

4)将样品垫、聚酯膜、胶金垫、硝酸纤维层和吸水纸，依次重叠相连粘贴在底板上，组装成检测试纸。

本发明的技术方案之三是提供一种上述的膀胱癌检测试纸在检测中的应用，即将液体样品滴于所述的试纸样品垫一侧，通过抗原与抗体特异性结合反应，使胶体金聚集而显色，从而实现结果判断。

上述的膀胱癌检测试纸在检测中的应用的优选方案之一为，所述试纸的检测限低于200ug/L尿纤维连接蛋白。