[发明专利]革兰阳性需氧菌鉴定板及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及生物制剂。具体涉及一种革兰阳性需氧菌鉴定板及其制备方法。

背景技术

近20年来，由于临床上广泛大量地使用种类繁多的抗菌药物，细菌的耐药 性越来越普遍，有的细菌可同时耐2-7种药物，耐药菌株的广泛传播给临床治疗 带来很大困难，特别是对于医院内感染的细菌。医院内感染是出现在医院环境中 的感染，并易发生流行，故又可将其称为医院获得性感染(Hospital acquired infection)。虽然发生医院感染的病情有轻有重，但都给病人增加了额外的痛苦、 经济负担和不幸，同时也会由于延长住院时间而加重医疗和护理工作的负担，影 响病床周转。严重的医院感染往往使病人所患的疾病不能达到预期的疗效，甚至 产生难以治疗的后遗症或死亡。据美国的一次不完全统计资料报告，其住院病人 中约有5％发生医院感染，平均延长住院4～5d，每年约有10万人死亡于医院感 染，估计每年由于医院感染要多消耗20余亿美元。

从引起医院感染的微生物来看，固然有些仍是所熟悉的致病性很强的微生 物，但是近年来医院感染的病原体种类有明显变化的趋势，革兰氏阴性菌已取代 了原来为主要病原的革兰氏阳性球菌，其中肠杆菌科及假单胞菌约占医院感染的 60％-65％，并且主要为多耐药性细菌。由于广泛应用抗生素，细菌的不断变迁， 助长了医院内感染的存在和发展，今日的临床微生物学最重要的特点是向医院感 染方面转变。

微生物鉴定及药敏分析系统是主要应用于临床实验室的高科技体外诊断产 品，对辅助临床各科室诊断治疗具有重要意义。目前在国际上，对细菌的快速鉴 定和药敏分析已经取得了很大的进展，微生物自动化检测产品逐步替代了手工检 测。

目前，微生物自动化检测产品主要有：法国生物-梅里埃公司的VITEK-AMS 微生物分析系统、美国Dade-MicroScan公司的MicroScan自动微生物鉴定和药 敏测试系统以及英国Trek Diagnostic System Ltd.的SENSTITRE荧光法快速微生 物鉴定和药敏分析系统。它们的工作原理相近，主要是根据细菌理化性质的差异， 采用光电比色，测定细菌生长分解底物导致PH值改变而产生的不同颜色和浊度 变化来判断反应情况，从而给出鉴定药敏结果。

但是，上述检测产品在临床推广上，用于微生物鉴定主要存在以下几个方面 的问题：

(1)鉴定时间偏长，需要16-24小时给出结果；

(2)鉴定范围比较狭窄，可以鉴定的细菌种类少。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计一种快速准确革 兰阳性需氧菌鉴定板。

本发明的鉴定检测实验基于下列原理：

根据目前微生物鉴定领域权威的伯杰细菌鉴定手册，细菌的鉴定主要通过检 测细菌对各种营养物质的利用情况，即通过检测细菌生化反应特性来鉴定细菌。 而细菌利用营养物质发生生化反应的过程中，会发生一系列的氧化还原反应，这 些氧化还原反应中会产生NADH，而NADH能够把四唑紫(2，3，5-triphenyl tetrazolium chloride，TTC)指示剂由无色的氧化型转变为紫色的还原型。因此我 们使用四唑紫作为细菌发生生化反应的指示剂，来检测细菌的生化反应特性，从 而达到细菌鉴定的目的。

不同细菌利用不同碳源或氮源进入新陈代谢过程，而对其他一些碳源或氮源 则无法利用，这些特性是细菌的遗传物质所决定的。目前现有的微生物鉴定板最 多只有30个生化反应，因此对于鉴定细菌的种类方面比较狭窄，可以鉴定的革 兰阳性菌种类最多只有150余种，且不同种类的细菌需要使用不同种类的板条进 行鉴定，同时需要通过补充实验进行验证才能得出鉴定结果，操作比较繁琐。

因此，为了克服上述不足之处，达到鉴定所需细菌的目的，就需要选择一组 合适的碳源和氮源。本发明人选择了500多种碳源和氮源，对多种细菌进行检测， 通过对这些数据的分析整理，最终确定目前板条的碳源和氮源的组合(见下表)。 该种鉴定板上的47个碳源和氮源组合可鉴定的革兰阳性菌种类有300余种，可 以鉴定葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、阳性杆菌等多种不同种类的细菌，且 不需要进行补充实验就可以得出鉴定结果。

革兰阳性需氧菌鉴定板底物表