[发明专利]检测缺血修饰白蛋白的试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及生物试剂。具体涉及一种检测缺血修饰性白蛋白试剂盒及其制 备方法。

背景技术：

缺血修饰白蛋白是当缺血/再灌注发生时，由于自由基等破坏了血清白蛋白 的氨基酸序列，而导致白蛋白与过渡金属的结合能力改变，这种因缺血而发生与 过渡金属结合能力改变的白蛋白则称缺血修饰白蛋白(IMA)。

近年来，心肌损伤标志物有了迅速的发展。肌钙蛋白(cTn)、肌红蛋白(Myo)、 肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)质量的检测已在临床上得到广泛的应用，逐步取代 原有的酶活性的检测。但对于急性冠状动脉综合症(Acute Coronary Syndromes， ACS)的诊断问题尚未得到妥善解决。

另外ECG(心电图)、CK(肌酸激酶)、CK-MB(肌酸激酶同工酶)、Myo(肌 红蛋白)、cTnT(肌钙蛋白T)、cTnI(肌钙蛋白I)等也是检测指标，但它们有 下列不足：

ECG：灵敏度一般低于50％

CK、CK-MB、Myo：特异性差，在骨骼肌中也存在

cTnT、cTnI：特异性高，但只有在心肌缺血6-12小时后才能检出，且仅在 不可逆的细胞损害及细胞膜的完整性破坏之后才升高，即它是对心肌细胞损伤的 特异性高。

除上述之外，IMA(缺血修饰白蛋白)：是心肌缺血的特异标志物，ACS(急 性冠状动脉综合症)疑似患者就诊时单独测定的灵敏度为82％，与ECG和cTn联 合测定的灵敏度可以达到95％，说明其具有很高的灵敏度和阴性预测值。

缺血修饰白蛋白的测定对临床医师而言：一个低危险度的患者，如果IMA 结果正常(低于判断值)并伴ECG无明显异常和cTn正常，可以排除急性冠状动脉 综合症？。这是一个非常好的让急诊患者早期出院的指征。但对于一个高危险度 的患者，不能就此简单的将正常的IMA看成是早期可以出院的指征。因而，目前 还不宜将IMA正常患者，都作为可以早期出院的指征。

1999年Bar-or等“发现心肌缺血发作时，人血清白蛋白(Human serurrl album in，(HSA)N一末端将发生改变。当其N一末端受损或铜占据的HAS称为缺 血修饰白蛋白(ischemia modified album in，IMA)。近年来众多研究显示IMA 是急性心肌缺血的一种理想的生化标志物。

ACB试验(钴结合实验)利用IMA结合过渡金属能力减弱的性质进行定量测定。 正常对照的血清标本中白蛋白以活性形式存在，加入氯化钴溶液后，C即可与白 蛋白N末端结合，溶液中存在的游离Co2浓度较低；而缺血个体的血清标本中含有 较多IMA，加入同样浓度的氯化钴溶液，由于IMA与C结合的能力弱，溶液中存在 较高浓度的游离。利用二硫苏糖醇(DTT)可以与游离C产生红色反应，IMA含量与 颜色程度呈正比，在505rma处检测吸光度，可间接对IMA进行定量测定。

但是以往的钴结合实验特异性不强，从而造成很多假阳性结果。DTT跟蛋白 形成的化合物颜色稳定时间短。反应的时间也比较慢，在自动生化仪上有时候反 应难以进行。试剂的稳定性也不强。DTT很容易被氧化从而容易分解。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，提供一种提高试剂稳定 性和灵敏度的检测缺血修饰性白蛋白的试剂。

本发明基于下列原理：

(1)选用有效的表面活性剂加速反应：TrionX-100、TrionX-405；

(2)为了保证试剂的稳定性，添加了特殊的保护剂，如：谷胱甘肽、氯化 钾等。

本发明提供了一种检测缺血修饰性白蛋白的试剂盒，该试剂盒由下列试剂1 和试剂2组成的：

试剂1：

缓冲液               10-200mmol/L

C_OCl₂                10-100mmol/L

Triton x-100         0.01-20ml/L

NaCl                 20-100mmol/L

MnCl₂                20-100mmol/L

去离子水             1L

试剂2：