[发明专利]鸡传染性支气管炎抗体免疫胶体金快速检测试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫应用领域，涉及动物分子生物学、免疫学等相关领域。具体的讲，本发明属于一种快速检测鸡传染性支气管炎病毒抗体的试剂盒，主要是确定被检鸡是否感染过鸡传染性支气管炎病毒或免疫过的鸡体内是否产生了相应的抗体。

背景技术

众所周知，禽流感、新城疫、法氏囊、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、鸡毒霉形体病、马立克、减蛋综合症等疫病是危害全球养禽业的重要疫病。

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是由(infectious bronchitis virus，IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病，能引起呼吸道、输卵管、肾脏、肠道及腺胃等多种部位病变。该病呈全球性分布，鸡不分年龄、性别和品种均易感，但主要侵害1～4周龄的幼鸡。它可导致鸡的增重和饲料报酬降低，蛋的产量、质量和孵化率下降，死亡率升高等，造成很大的经济损失，阻碍养禽业的发展。虽然有疫苗进行免疫接种，但免疫鸡群仍频频发病，给我国养禽业生产造成了巨大的经济损失。

而今，对鸡传染性支气管炎的监测和检测仍停留在原有的经典方法上，如琼脂扩散试验(Agarose gel immunodiffusion；AGID)、血凝抑制试验(Hemagglutination inhibition；HI)和酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay；ELISA)、病毒中和试验(Virus Neutralization Test；VNT)等，这些方法有的耗费时间长(如琼脂扩散试验需24～48小时；血凝抑制试验需2～3小时；ELISA试验需3～5小时等)，有的需要昂贵的仪器设备和繁琐的操作步骤，只能在实验室完成，不便于适时和快速诊断。

免疫层析(immunochromatography)是出现于八十年代初期的一种独特的免疫分析方法，该方法的核心技术是以条状纤维层析材料为固相，通过毛细管作用使样品溶液在层析条上泳动，并同时使样品中的待测物与层析材料上针对待测物的受体(如抗原或抗体)发生高特异性、高亲和性的免疫反应。胶体金免疫层析分析(gold-immunochromatography assay；GICA)是应用胶体金标记技术，以胶体金作为示踪物，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术(Osikowicz G et al.One-step chroma-tographic immunoassay for qualitative determination of choricogonadotropin in urine.ClinChem.1990，36，1586)。层析过程中，金标记物与事先固相化于层析材料(例如硝酸纤维素膜，即NC膜)上的抗原或抗体(检测线，T线)发生特异性的免疫反应而被截留，进一步富集，形成肉眼可见的紫红色条带，从而得到直观的实验结果，达到快速检测的目的。这种方法对所使用的抗原抗体的要求较高，要求具有好的特异性和高纯度。

依据这种原理，已经研制出了很多胶体金免疫层析快速检测试纸条。在人医应用方面，国内外已在激素、传染病病原的抗原和抗体、性病病原、细菌、寄生虫、肿瘤标记物、心血管病标志物、药物以及其他一些蛋白质等方面应用了金标免疫层析试纸条。在兽医应用方面，例如在猪瘟、犬细小病毒病等方面也应用了金标免疫层析试纸条。在鸡疫病诊断和检测方面，中国发明专利(专利号ZL99101537.1)，公开了一种畜禽疫病快速诊断试纸条的制备及应用，但该发明的要点是针对畜禽疫病病原的检测，并未涉及对鸡传染性支气管炎抗体的诊断检测。鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒实用新型专利申请(申请号02285790.7)为ELISA方法，且未公开其采用的生物材料样品，也没有提交用于专利程序的生物材料样品的保藏，本领域的技术人员无法实施该发明并达到该发明所示的效果。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的缺点。其第一个目的是组装一种用于鸡传染性支气管炎抗体的试剂盒；第二个目的是本发明的试剂盒在鸡传染性支气管炎抗体检测中的应用。

本发明的总体技术路线图见图1所示。

本发明是这样实现的：