[发明专利]合成核苷酸序列及获得转基因植物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于人工合成的核苷酸序列及其用途，即通过植物转化而获得抗虫转基因植物的方法。

背景技术

杀虫毒素是一种具有重要运用价值的蛋白质，它可以用来改造杀虫微生物农药，也可以用于转基因抗虫作物。目前转基因抗虫技术已经大量商业化运用(James C.2004 ISAAA Briefs No.32.Ithaca，NY：ISAAA.43pp)，为害虫的治理提供了一种低成本的新型技术。目前植物转基因技术也已经是一种成熟技术。

目前杀虫蛋白质有多种。比较常用的是Bacillus thuringiensis(Bt)晶体蛋白质，例如Cry1Ab，Cry1C，Cry2，Cry3等(Crickmore，N.，Zeigler，D.R.，Feitelson，J.，Schnepf，E.，Van Rie，J.，Lereclus，D.，Baum，J.&Dean，D.H.1998 Microbiol.Mol.Biol.Rev.62，807-813)。现在已经商业化推广的转基因抗虫植物都是基于Bt晶体杀虫蛋白质。但是目前已发现多种昆虫可以产生对晶体杀虫蛋白质的抗性。抗性的发展影响了这些晶体毒素的抗虫性能和可利用性(Ferre，J.&Van Rie，J.(2002)Annu.Rev.Entomol.47，501-533)。没有交叉抗性的不同杀虫蛋白质共同使用或轮流使用可以有效减缓害虫抗性的发生(Zhao J-Z，Cao J，Li YX，Collins HL，RoushRT，Earle ED&Shelton AM.2003 Nature Biotechnol.21，1493-1497)。因此，获得基于不同杀虫毒素的抗虫植物，对提高杀虫能力和防止抗性发展具有重要应用价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种人工合成的核苷酸序列，其可用于降低害虫对农作物的危害。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种人工合成的核苷酸序列，如SEQID NO：1所示。

本发明还提供根据上述人工合成的核苷酸序列所编码的杀虫蛋白质，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2。

本发明还提供了另一种人工合成的核苷酸序列，其编码的蛋白质包含一个与SEQ ID NO：3有80％或者80％以上的氨基酸序列相同性的区域。

本发明还提供了一种质粒，其包含上述核苷酸序列。

本发明还提供了一种获得转基因植物的方法：稳定地导入了上述核苷酸序列。

作为本发明的获得转基因植物的方法的改进：在农作物中表达的杀虫蛋白质中包含一个与SEQ ID NO：3有80％或者80％以上相同性的区域。

作为本发明的获得转基因植物的方法的进一步改进：植物为水稻、玉米、大豆、棉花、高粱、大麦或小麦。

本发明还提供了一种检测转基因植物中是否含有上述核苷酸序列的方法，包括如下方法中的至少一种：1)、根据上述核苷酸序列设计引物，利用PCR的方法检测；2)、从植物中提取DNA进行Southern杂交；3)、从植物中提取蛋白质进行western分析。