[发明专利]一种用于胃癌组织的微小RNA探针及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及微小RNA，具体涉及一种用于胃癌组织的微小RNA探针及其检测方法。

背景技术

微小RNA是一类长度为19～24nt，在进化上比较保守的不编码蛋白质的单链小分子RNA，是近年来新发现的基因调节因子；在动物和植物细胞中，微小RNA通过对目标mRNA的切割或翻译的抑制而发挥重要的调节作用。

微小RNA在生物体的正常发育中起着举足轻重的作用，人体基因组中已发现有250个左右的微小RNA，在不同组织细胞的生理异常变异中某些微小RNA具有明显的异常表达，具体说在不同组织的肿瘤发生与某些微小RNA的表达和功能异常有密切的关系，大约有50％的得到注解的微小RNA在基因组上被定位为与肿瘤相关的脆性位点，因此对不同类型肿瘤组织中具体微小RNA的表达和功能异常的研究受到人们的重视。

如Calin等于2002年首次报道了慢性B淋巴细胞白血病中常见的13q14的缺失可导致2种微小RNA基因(miR-15a和miR-16a)的不表达，提示微小RNA具有抑制白血病发生的作用(Proc Natl Acad Sci USA 2002；99：15524)。随后，通过对结肠癌中28种微小RNA表达谱的分析，Michael等发现miR-143和miR-145的表达下调有可能促进了肿瘤的发生(Mol Cancer Res 2003；1：882)。进一步扩大观察的病种数，通过研究肿瘤细胞与正常细胞的微小RNA表达谱的差异，人们发现了至少21种在多种肿瘤中异常表达的微小RNA(Proc Natl Acad Sci USA 2006；103：2257)。

我国是胃癌组织高发区，现有的技术中均没有涉及到胃组织的癌变与哪些低表达的微小RNA有关。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于检测胃癌组织的微小RNA低表达的微小RNA探针，还提供了利用该探针检测胃癌组织的微小RNA表达异常的方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种用于胃癌组织的微小RNA探针，探针的序列由化学修饰过的寡聚核苷酸编码片段和延伸臂片段组成，所述的寡聚核苷酸编码片段包括下述微小RNA：hsa-miR-375、hsa-miR-34c-3p、hsa-miR-141、hsa-miR-7、hsa-miR-200a、hsa-miR-1、hsa-miR-29b、hsa-miR-200b^*、hsa-miR-31、hsa-miR-497、hsa-miR-146a、hsa-miR-200b、hsa-miR-378、hsa-miR-148a、hsa-miR-203、hsa-miR-34a、hsa-miR-140-3p、hsa-miR-215、hsa-miR-29c、hsa-miR-429、hsa-miR-155、hsa-miR-768-3p、hsa-miR-200c、hsa-miR-768-5p、hsa-miR-936、hsa-miR-195、hsa-miR-10a、hsa-miR-192、hsa-let-7b、hsa-miR-98、hsa-let-7c、hsa-miR-16、hsa-let-7f、hsa-let-7d、hsa-miR-320、hsa-let-7e、hsa-miR-29a、hsa-let-7a、hsa-miR-26b、hsa-let-7g和hsa-miR-145。

一种检测胃癌组织的微小RNA的方法，依次包括总RNA提取、总RNA质量分析、微离心过滤得到小RNA样品、添加Poly(A)聚合酶和用Cy3和Cy5特异性荧光标记小RNA样品，用上述的探针对荧光标记的小RNA样品杂交检测。

化学修饰过的寡聚核苷酸编码片段能与靶微小RNA互补杂交；延伸臂片段能使与它连接的编码片段离片基有一定的距离，减少杂交空间阻碍；探针杂交的Tm值是通过化学修饰来平衡的。

探针是由光敏试剂原位合成为微流体芯片。

上述微小RNA在RNA基因数据库中都能找到，延伸臂片段可以用分子生物学上能减少杂交空间阻碍的任何延伸臂片段。