[发明专利]一种化合物在防治黄瓜枯萎病和番茄灰霉病中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及生防放线菌——淀粉酶产色链霉菌D的培养及其代谢产物的分离与应用。

背景技术

放线菌(Actinomycetes)与人类的关系极为密切。据统计，在已发现的抗生素中，有61.7％为放线菌所产生。常用的抗生素除青霉素和头孢霉素类外，绝大多数都是放线菌的产物。土壤是放线菌栖居的重要场所，从土壤中获得具有高效抗菌活性的放线菌产生抗生素是目前世界范围内研制开发新医药和新农药必不可少的基础工作。

目前对植物病害的防治，主要采用化学农药杀灭病原菌，但化学农药对人畜的毒副作用和残留问题至今仍难以有效的解决。利用放线菌产生的抗病原真菌的活性物质进行植物病原真菌病害的生物防治，则具有周期短、易于研究、便于生产、无毒无害等优点。

本发明从杭州的土壤中分离到一株生防放线菌，并对此生防放线菌发酵代谢产物中的抗菌成分进行分离，得到了主要活性成分，经四大光谱分析，明确了其结构式。该发明为微生物源农药的进一步研制和开发提供优良的出发菌株和生物活性化合物。

发明内容

本发明的目的是针对化学农药不安全与微生物源农药种类较少的不足，提供一种从杭州土壤中分离筛选出的放线菌-淀粉酶产色链霉菌D；本发明的另一目的是提供利用该菌株通过发酵提取其代谢产物制备成防治部分植物真菌病害的微生物农药及其制备方法。

本发明淀粉酶产色链霉菌的分离、筛选与鉴定：

是于2006年8月在浙江杭州临安天目山采集的土样中，经分离、培养、发酵、活性测定以及对抑制植物真菌病害病原菌有效菌株的筛选等步骤获得并保存；经微生物分类学鉴定为淀粉酶产色链霉菌(Streptomycesdiastatochromogenes)，定名为淀粉酶产色链霉菌(Streptomycesdiastatochromogenes)D。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日期2007年5月25日，保藏登记号CGMCC No.2060。

淀粉酶产色链霉菌D显微形态特征：孢子丝直、钩状、松散螺旋形，孢子长圆、椭圆或卵圆形。

本发明所述的淀粉酶产色链霉菌D，经发酵提取可获得对部分植物真菌病害病原菌具有抑制作用的活性化合物[2，4-Dioxo-1-(3，4，5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydro-pyran-2-yl)-1，2，3，4-tetrahydro-pyrimidin-5-yl]-methylamino-acetic acid。

本发明目的通过以下技术方案来实现：

一种防治番茄灰霉病和黄瓜枯萎病等植物真菌病害微生物农药的制备方法，按以下步骤进行：

(1)菌种的活化培养：将分离保存的淀粉酶产色链霉菌D菌种移至试管内高氏一号斜面上，在28℃±1℃条件下，培养至试管斜面长满孢子；

(2)发酵培养：发酵培养液为每1000mL中含有黄豆饼粉20g，玉米粉15g，麸皮10g，NH₄NO₃3g，(NH₄)₂SO₄5g，CaCO₃5g，MgSO₄1g，灭菌，待冷却至40℃，在无菌条件下接种淀粉酶产色链霉菌D至发酵培养液中，在28℃±1℃条件下，培养5天；

(3)发酵物提取：发酵完毕，收集发酵液，按常规化学方法提取、层析，分离纯化获得活性化合物[2，4-Dioxo-1-(3，4，5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydro-pyran-2-yl)-1，2，3，4-tetrahydro-pyrimidin-5-yl]-methylamino-acetic acid，该化合物分子式为C₁₃H₁₉O₉N₃，结构式见下式；

(4)将此活性化合物配以农用药物辅料，制备成多种剂型的农用药物。

本发明的有益效果：

一是本发明从杭州土壤分离筛选出代谢物产量高、并对部分植物真菌病害病原菌具有较强抑制作用的淀粉酶产色链霉菌D，这为农业上防治植物真菌病害病原菌提供了一种微生物菌株；