[发明专利]塑料试管蛋白芯片、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种塑料试管蛋白芯片，包括塑料试管片基和固定于该芯片上的蛋白质，塑料试管大小为0.5ml-5ml，基片大小为0.2-3cm²，其特征在于：所述的蛋白质能与体内某一疾病的至少两种标志蛋白特异结合。

2.按照权利要求1的塑料试管蛋白芯片，其特征在于：所述的蛋白质按照下述特征固定在塑料试管的基片上：分布密度是25-200点/cm²，一个点为一种蛋白质；蛋白质点样的量是0.1ng/点-10ng/点。

3.根据权利要求1的蛋白芯片，其特征在于，所述蛋白质选自抗原、抗体、受体、配体或多肽药物中的任一种或多种。

4.一种制备权利要求1所述塑料试管蛋白芯片的方法，包括：

使用芯片自动点样系统，通过物理吸附或共价结合的方式，将能够与体内某一疾病的标志性蛋白特异结合的多种蛋白质按照下述要求分别固定在塑料试管上：密度分布范围：25-200点/cm²；每个点的点样量为0.1-10ng，一个点为一种蛋白质。

5.一种制备权利要求1所述塑料试管蛋白芯片的方法，包括：

(1)将所要固定的蛋白质溶解于pH值为6-10.0的PBS缓冲液中；

(2)用芯片自动点样系统将溶解于PBS缓冲液中的蛋白质点制在塑料试管片基上，点样密度范围是25-200点/cm²，一个点为一种蛋白质，蛋白质点样量的范围为0.1-10ng/点；其中，塑料试管大小为0.5ml-5ml，基片大小为0.2-3cm²；

(3)放置过夜；用封闭液将蛋白芯片封闭10分钟-1小时；

(4)密封保存于惰性气体中，即得。

6.一种检测疾病的试剂盒，包括：权利要求1所述的塑料试管蛋白芯片；生物素标记液；链亲和素反应液；产生并增强化学发光反应的组合物；蛋白芯片的洗涤液；被检蛋白质的标准品；封闭液。

7.按照权利要求6的试剂盒，其特征在于：所述蛋白芯片的洗涤液含有PBS和0.05-0.2％的吐温20，pH值在6.0-9.0之间；所述的链亲和素反应液为耦联纳米；所述的产生并增强化学发光反应的组合物为起始剂和增强剂；所述封闭液中含有1-20％BSA或1-20％牛奶粉。

8.按照权利要求6的试剂盒，其特征在于：被检测标准品为actin蛋白。

9.权利要求6-8任何一项试剂盒的使用方法，包括：

(1)、用PBS稀释液将待测的体液上清液稀释5-20倍，使待测蛋白质浓度为0.5-2mg/ml，取1-2.5μl of NHS-succinimid-Biotin溶于25-100ul待测蛋白质在200-550rpm和20-37温度下振摇20-30分钟，反应形成A-labelled；

(2)、吸取含2-20％BSA标记蛋白，按照每平方厘米蛋白芯片50ul的体积滴加到蛋白芯片塑料试管中在200-550rpm下20-30温度作用20-30分钟；使体液中的特定蛋白质A-labelled与固定于蛋白芯片上的特异性蛋白B起反应，形成稳定复合物B-A-labelled；

(3)、吸干反应液，将蛋白芯片放在洗涤液PBS-T中振摇3-6分钟，重复二到三次；

(4)、吸取0.2-5ul纳米金溶液加入上述蛋白芯片塑料试管中，在200-550rpm下20-30温度作用20-30分钟；复合物B-A进一步与多蛋白混合液中的特异性结合蛋白C反应，形成稳定复合物B-A-labelled-C；

(5)、吸干反应液，将蛋白芯片放在洗涤液中振摇3-6分钟，重复二到三次；

(6)、将20-100ul增强剂和20-100ul初始剂加入上述蛋白芯片塑料试管中，通过塑料试管蛋白芯片仪于每30秒-1分钟的设置频率连续记录5min-1hr并通过计算机监控和保存；数据处理采用Partisian IconoClust软件定量计算；如采用标准品作对照，则被检测样品对标准品有强烈信号差异，表明该指标呈阳性。