[发明专利]一种改进型马传染性贫血琼扩抗原生产工艺

说明书

技术领域：本发明涉及一种用于诊断马传染性贫血病琼脂扩散 反应冻干抗原的生产工艺。

背景技术：与本发明最为接近的已有技术是中国专利87101214.6 号名称为“一种用于诊断马传染性贫血病琼脂扩散反应冻干抗原的制 备方法”该技术将接毒细胞培养物分为细胞相病毒及液相病毒分别进 行处理，用一般离心机3000-6000rpM离心30-60分 钟，每次离心量最大可达3000ml，制备出无色、透明马传染性 贫血病琼脂扩散反应抗原。该方法制备的液体抗原经加冻干保护剂 (按1％量加牛血清白蛋白)后冻干，其冻干抗原在37℃至少可保 存二个月效价不损失，从而解决了抗原长途和边远地区使用的困难。 存在的不足是：1、单位容积病毒培养细胞能生产的单位容积抗原少， 导致成本高、生产效率低下。2、采用离心工艺，离心过程繁琐、工 艺复杂。解决这些问题已成为急需。

发明的目的：克服现有技术的不足，提出一种抗原性更好、工艺 简单、成本低廉、生产效率高的改进型马传染性贫血琼扩抗原生产工 艺。一种改进型马传染性贫血琼扩抗原生产工艺包括如下步骤：清除 毒细胞培养物中的细胞、牛血清及色素；将收获的接毒细胞培养物分 为细胞相病毒(在贴瓶壁细胞中而没有释放到培养液中的病毒)和液 相病毒(在脱落瓶壁的细胞中或释放到培养液中的病毒)并分别进行 处理；毒细胞培养物的细胞相病毒直接加入原体积份数的20％的 0.01MpH7.4PBS，3次冻融裂解细胞；倒入有玻璃珠的三角瓶中，加 入乙醚摇晃，然后进行机械正压鼓风除乙醚，放入冰箱冷藏室中在4 ℃条件下沉降2小时吸出上清，制备出无色透明的马传染性贫血病琼 脂扩散反应诊断抗原，再标定其效价；最后冻干保存，在液体抗原中 加入1％量的牛血清白蛋白作为冻干保护剂。本发明将现有0.5％乳汉 液改变为0.5％乳汉液和MEM培养基各50％的混合培养液；将除醚方法 由自然挥发法改为机械正压风法，每一扁瓶(1000ml容积)病毒细 胞培养细胞能生产20ml抗原，是现有技术的4倍；采用本发明的工 艺生产的马传贫琼扩抗原与我国现行《规程》生产马传贫琼扩抗原液 在外观性状和抗原性没有差别；与古巴马传贫琼扩抗原和美国马传贫 琼扩抗原相比所产生的琼扩沉淀线更清晰、更致密而且更长，更有利 于判断，即抗原性更好。本发明的马传染性贫血琼扩抗原冻干时添加 的保护剂及其用量解决了琼扩抗原冻干后效价丧失而只能制备液体 抗原的难题。本发明的马传染性贫血琼扩抗原经加保护剂冻干后，在 37℃至少可保存二个月，在20-25℃至少可保存半年，在0-4℃至 少可保存两年，抗原效价不降低、解决了抗原长途运输或边远地区使 用的困难；而国外的同类产品是液体制剂，不易长途运输或长期保存。 由于以上原因采用本发明的工艺生产的马传贫琼扩抗原已经被指定 为北京2008年奥运会香港赛马项目用马的马传贫检测抗原。

具体实施方式：一种改进型马传染性贫血琼扩抗原生产工艺包括 如下步骤：清除毒细胞培养物中的细胞、牛血清及色素；将收获的接 毒细胞培养物分为细胞相病毒(在贴瓶壁细胞中而没有释放到培养液 中的病毒)和液相病毒(在脱落瓶壁的细胞中或释放到培养液中的病 毒)并分别进行处理；毒细胞培养物的细胞相病毒直接加入原体积份 数的20％的0.01MpH7.4PBS，3次冻融裂解细胞；倒入有玻璃珠的三 角瓶中，加入乙醚摇晃，然后进行机械正压鼓风除乙醚，放入冰箱冷 藏室中在4℃条件下沉降2小时吸出上清，制备出无色透明的马传染 性贫血病琼脂扩散反应诊断抗原，再标定其效价；最后冻干保存，在 液体抗原中加入1％量的牛血清白蛋白作为冻干保护剂，即为成品。