[发明专利]新品种鲤鱼的选育方法

权利要求书

1.新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于新品种鲤鱼按以下步骤选育：一、根据新品种性状的设计要求进行表型性状挑选，符合要求的鲤鱼作为繁殖亲本，表型性状挑选公式为公式中Xn为亲本的表型性状测定值，为鲤鱼群体表型性状的平均值，S为鲤鱼群体表型性状的标准差；二、检测亲本间的遗传信息a.提取繁殖亲本DNA；b.繁殖亲本DNA均用30对微卫星引物分别进行PCR扩增；c.利用图谱分析软件对PCR扩增产物进行数字化处理；d.数字化数据导入亲缘分析软件分析计算，获得遗传信息；三、根据遗传信息进行繁殖配组，繁殖亲本至少分成2个繁殖群体，每个繁殖群体中任意一对雌雄个体间的遗传距离应大于家系三代间的遗传距离；四、繁殖群体内自由交配、培育子代鲤鱼性成熟；五、以子代鲤鱼为新一代繁殖亲本，重复操作步骤一至四，直到子代鲤鱼群体达到新品种性状设计要求，即得到新品种鲤鱼。

2.根据权利要求1所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤b中每对微卫星引物的PCR反应总体积为25μL由18μL PCR反应缓冲液、50ng繁殖亲本DNA、1μL微卫星引物、1U Taq聚合酶和余量的无菌超纯水制成；其中PCR反应缓冲液每升由0.25mmol pH值为8.3的Tris·Cl、1.25mmol KCl、0.0375mmol MgCl₂、0.25mL Gelatin、2.5mL Tween、2.5mL NP-40、0.02mmol dNTP和余量的去离子水组成。

3.根据权利要求1所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤b中PCR反应程序为：94℃预变性3min，94℃变性30sec，退火30s，72℃延伸30s，循环38次，最后72℃延伸5min。

4.根据权利要求1所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤b中选用的30对微卫星引物及其退火温度分别为：

微卫星引物(1)上游引物：ATCCCTTACCGCCCTGTGT

             下游引物：AGCTGAAAAACGCTGTCACG

退火温度为：50℃，

微卫星引物(2)上游引物：ACTGCTGGCTCAGGAACA

             下游引物：AGAGCAAAGATGGTAGCTC

退火温度为：53℃，

微卫星引物(3)上游引物：CGTGGAGGCATAAGGGAT

             下游引物：ACGGGAGCGTACAGAAAT

退火温度为：53℃，

微卫星引物(4)上游引物：CACAGAACGCATCAGTAA

             下游引物：TGTAAACCTTCAACCTCC

退火温度为：53℃，

微卫星引物(5)上游引物：AGACCACCGCAGTAACAA

             下游引物：GACTCACTCAGCACCAGA

退火温度为：53℃，

微卫星引物(6)上游引物：GTACAGCGTGACAGCAT

             下游引物：AAGTTCATCGGTGTCCTC

退火温度为：53℃，

微卫星引物(7)上游引物：AACCCTGAACTCACAAAC

             下游引物：CACGGAAACTGAGAAGAC

退火温度为：53℃，

微卫星引物(8)上游引物：GATTTGTGCTCCTCAACC

             下游引物：CTGTCACTTCTCCTTCCA

退火温度为：54℃，

微卫星引物(9)上游引物：GGTACAACGGGAACCACA

             下游引物：TGATTGACAGGCAGTGGG

退火温度为：54℃，

微卫星引物(10)上游引物：CAGATGGCAGACAGGTAA

              下游引物：GAGCAAGTGAGGGAACAG

退火温度为：53℃，

微卫星引物(11)上游引物：CgATCACTGGCAAGATTA

              下游引物：ATGGACTACACCTCACCC

退火温度为：54℃，

微卫星引物(12)上游引物：GAAGAATGGGTGAGTAAGA

              下游引物：ACTAGGATTTGGAAGAGC

退火温度为：51℃，

微卫星引物(13)上游引物：TCTACTTCTACCGCCACT

              下游引物：GACTATTCACCTGCATCTT

退火温度为：54℃，

微卫星引物(14)上游引物：GGGGAGACGAGAAGTGCA

              下游引物：AGCAGGTCTGTGGGCAAG

退火温度为：54℃，

微卫星引物(15)上游引物：AGGCAGACGAAAGGTAAA

              下游引物：CTCGCTTCTGTAGGCATT

退火温度为：54℃，

微卫星引物(16)上游引物：GGCTCCTCCTCATCCTCT

              下游引物：GCACTTCTGCACCTTTCA

退火温度为：51℃，

微卫星引物(17)上游引物：GGCTACAAGGCAACACTG

              下游引物：TGCGGTTAATGAGGTCTG

退火温度为：54℃，

微卫星引物(18)上游引物：TGCGGTCATTACTCATTCG

              下游引物：CCCAGCACCTGTTTCCAC

退火温度为：54℃，

微卫星引物(19)上游引物：CATTACTTGAACTATCATCCA

              下游引物：TGTGCTGAGGATTATTGG

退火温度为：54℃，

微卫星引物(20)上游引物：AAGAAGCCTCGGTCCTCC

              下游引物：AAAGCCCAAAGCACATCA

退火温度为：51℃，

微卫星引物(21)上游引物：TCTGCTGAAGGGCGAACA

              下游引物：ACGATCACGCTGCGACTA

退火温度为：48℃，

微卫星引物(22)上游引物：GGTGTCAGGCTTTAGTCC

              下游引物：CATCTGAGTTTTCTCCAAGT

退火温度为：48℃，

微卫星引物(23)上游引物：ATCATCACAGCCAAAGAAGT

              下游引物：TACGGACATAGTGCAGACAA

退火温度为：48℃，

微卫星引物(24)上游引物：GACGATCCAGCAGCAATG

              下游引物：CTCTTCCTAAAGCCTCAAA

退火温度为：48℃，

微卫星引物(25)上游引物：GAGAACACGGCTGGATGG

              下游引物：GTGGGTGTTTGAATTGAGAT

退火温度为：48℃，

微卫星引物(26)上游引物：CGACCGAACTCAGAACAC

              下游引物：GAGCACCGCATTAACAGA

退火温度为：48℃，

微卫星引物(27)上游引物：AGTGTCGTTTATGCGTATCTT

              下游引物：AGCTCGCCTACTCTTCTACT

退火温度为：48℃，

微卫星引物(28)上游引物：AGTGGAGGACGTGACAGT

              下游引物：AAGCAGAGCCTGATTTGA

退火温度为：54℃，

微卫星引物(29)上游引物：ATCACCAGTACATTCACT

              下游引物：CGTTTAGCAAAGGTTAGT

退火温度为：53℃，

微卫星引物(30)上游引物：AAGGACGACGGAAGGTTT

              下游引物：ACACTGACGGGTCAAGAG

退火温度为：50℃。