[发明专利]神经营养因子

权利要求书

1.分离的Neublastin核酸，所述核酸含有选自下列的序列：

a)SEQ ID NO：1的核苷酸序列；

b)核酸序列，其含有编码表达包含SEQ ID NO：2的AA₁-AA₁₀₅的Neublastin多肽或由其衍生的神经营养多肽的开放阅读 框，其中，所述神经营养多肽通过在所述Neublastin多肽的 序列中添加、缺失和/或替代少于10.5个氨基酸或通过对该 序列中少于10％的残基进行保守替代而衍生自所述 Neublastin多肽，其中，所述神经营养多肽具有在SEQ ID NO：2的第8、35、39、72、73、101和103位保守的7个 半胱氨酸残基；

c)核酸，其在高度严紧的溶液杂交条件下能与具有SEQ ID NO：1核苷酸序列的核酸或其互补链特异性杂交，并编码神 经营养多肽。

2.权利要求1的核酸，其编码的多肽是SEQ ID NO：2的 AA₁-AA₁₀₅。

3.权利要求1的核酸，其中所述编码的神经营养多肽包含GDNF 亚族基序：LGLG-FRxCxGxC-xxCCRP-SAxxCxC。

4.权利要求1的核酸，所述编码的神经营养多肽是神经营养因子 的GDNF亚族成员。

5.含有权利要求1至4之任一项的核酸的表达载体。

6.以权利要求1至4之任一项的核酸和/或权利要求5的表达载 体体外转化的细胞。

7.权利要求6的细胞，其中所述细胞是真核细胞。

8.权利要求7的细胞，其中所述细胞选自哺乳动物细胞和包括酵 母细胞的真菌细胞。

9.权利要求8的细胞，其中所述细胞选自中国仓鼠卵巢细胞、 HEK293、COS、PC12、HiB5、RN33b和人神经干细胞。

10.神经营养多肽，所述多肽含有由SEQ ID NO：2的AA₁-AA₁₀₅组成的氨基酸序列、或者通过添加、缺失和/或替代少于10.5个氨基酸 而从该序列衍生的序列、或者通过对由SEQ ID NO：2的AA₁-AA₁₀₅组成的氨基酸序列中少于10％的残基进行保守替代而由该序列衍生 的序列，或者所述多肽由能够在高度严紧的溶液杂交条件下与具有 SEQ ID NO：1的核苷酸序列的核酸或其互补链特异性杂交的核酸编 码，

其中所述神经营养多肽具有在SEQ ID NO：2的第8、35、39、 72、73、101和103位保守的7个半胱氨酸残基。

11.权利要求10的神经营养多肽，其包含GDNF亚族基序： LGLG-FRxCxGxC-xxCCRP-SAxxCxC。

12.权利要求10的神经营养多肽，其中所述多肽是GDNF亚族 成员。

13.权利要求10的神经营养多肽，其含有SEQ ID NO：2所示 的氨基酸序列。

14.权利要求10-13任一项的多肽，其中所述多肽是糖基化的。

15.权利要求10的多肽，其中所述多肽由权利要求1至4之任一 项的核酸所编码。

16.制备权利要求10至15之任一项的多肽的方法，所述方法包 括由所述多肽的编码核酸表达所述多肽的步骤。

17.权利要求16的方法，所述方法包括在允许生产所述多肽的培 养基中培养含有所述Neublastin神经营养因子核酸的细胞的步骤。

18.权利要求17的方法，其进一步包括从所述培养基中回收所述 多肽的步骤。

19.组合物，其含有权利要求10-15之任一项的多肽和药物可接 受的载体。