[发明专利]固体－液体交替培养诱导杂交鹅掌楸液体悬浮细胞体胚高频发生与植株再生方法

权利要求书

1.一种固体-液体交替培养诱导杂交鹅掌楸液体悬浮细胞体胚高频发生与植株再生方法，其特征在于：采集人工杂交授粉发育的杂交鹅掌楸聚合翅果，在无菌条件下，分离球形期至子叶期的未成熟合子胚，按以下顺序和条件进行诱导、培养获得杂交鹅掌楸植株：

a.胚性愈伤诱导阶段，诱导培养基采用1/2 MS基本培养基；

b.胚性愈伤组织的增殖阶段，培养基采用1/2 MS基本固体培养基；

c.胚性愈伤组织悬浮细胞系的建立和预增殖阶段，培养基采用MS基本液体培养基；

d.胚性悬浮细胞的增殖阶段，培养基采用MS基本液体培养基；

e.胚性悬浮细胞增殖中止和原胚形成阶段，培养基采用MS改良液体培养基；

f.体细胞胚发育阶段，培养基采用MS改良固体培养基；

g.体胚植株再生阶段，培养基采用MS改良固体培养基。

2.如权利要求1所述的固体-液体交替培养诱导杂交鹅掌楸液体悬浮细胞体胚高频发生与植株再生方法，其特征在于不同培养阶段使用的不同形态培养基中，还可加入适当的添加剂，具体添加物质和用量如下：

a.胚性愈伤诱导阶段：1/2MS基本培养基，附加浓度为0.4～5.0mg/L的2，4-D，0～0.6mg/L的6-苄胺基嘌呤，500～1000mg/L的天然复合物水解酪蛋白和1～5mg/L的维生素C，调pH为5.7；

b.胚性愈伤组织的增殖阶段，采用1/2 MS基本固体培养基，附加浓度为0～0.5mg/L的2，4-D，0～0.25mg/L的6-苄胺基嘌呤，500～1000mg/L的天然复合物水解酪蛋白和L～5mg/L的维生素C，调pH为5.7；

c.胚性愈伤组织悬浮细胞系的建立和预增殖阶段，采用MS基本液体培养基，附加蔗糖25～60g/L，0～2.5mg/L的2，4-D，0～0.25mg/L的6-苄胺基嘌呤，500～1000mg/L的天然复合物水解酪蛋白和1～5mg/L的维生素C，调pH为5.7；

d.胚性悬浮细胞的增殖阶段，采用MS基本液体培养基，附加浓度为1.0～10.0mg/L的ABA，0～5.0mg/L的GA，蔗糖20～60g/L，500～1000mg/L的天然复合物水解酪蛋白和1～5mg/L的维生素C，调pH为5.7；

e.胚性悬浮细胞增殖中止和原胚形成阶段，采用MS改良液体培养基，附加浓度为1.0～10.0mg/L的ABA，0～5.0mg/L的GA，蔗糖20～60g/L，1～5mg/L的维生素C，调pH为5.7；

f.体细胞胚发育阶段，采用MS改良固体培养基，附加浓度为1.0～10.0mg/L的ABA，0～5.0mg/L的GA，蔗糖20～60g/L，1～5mg/L的维生素C，琼脂5g/L，调pH为5.7。